[發(fā)明專利]燕麥隱性核不育基因分子標(biāo)記及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910026024.7
• 申請日: 2019-01-11
• 公開（公告）號: CN109644863A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張麗君;劉龍龍;馬名川
• 申請（專利權(quán)）人: 山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)作物品種資源研究所
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 西安匯智創(chuàng)想知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 61247
• 代理人: 李恒

1.一種燕麥隱性核不育系RI2014的生產(chǎn)方法，其特征在于：包括以下步驟：

將原始發(fā)現(xiàn)的隱形核不育皮燕麥“CAMS”和裸燕麥“80066”雜交，雜交種通過自交一代獲得F₂代，選擇不育的裸燕麥與裸燕麥“80066”回交、自交一代得到BC₁F₂，選擇不育的裸燕麥與裸燕麥“80066”繼續(xù)回交、自交一代得到BC₂F₂，選擇不育的裸燕麥與裸燕麥“80066”繼續(xù)回交、自交一代得到BC₃F₂，通過單粒傳法構(gòu)建重組自交系，在F₁₂代篩選得到的裸燕麥不育系RI 2014。

2.權(quán)利要求1所述的一種燕麥隱性核不育系RI2014的用途，其特征在于，燕麥隱性核不育系RI2014與不同皮燕麥、裸燕麥雜交得到的F₁均可育。

3.一種燕麥隱性核不育系RI2014不育基因的分子標(biāo)記方法，其特征在于：以編號為CL1155，CL907，CL210，Uni2358，Uni2612，CL248，Uni20087對引物，進(jìn)行PCR擴增，將所得產(chǎn)物利用聚丙烯胺凝膠檢測，能夠進(jìn)行擴增的即為含有不育基因的單株，結(jié)合單株表型，將控制RI2014S不育系育性性狀的基因定位于染色體23.0Mb區(qū)段內(nèi)，所述的編號為CL1155的正向引物序列如序列表中SEQ ID NO:1所示，所述的編號為CL1155的反向引物序列如序列表中SEQ ID NO:2所示，所述的編號為CL907的正向引物序列如序列表中SEQ ID NO:3所示，所述的編號為CL907的反向引物序列如序列表中SEQ ID NO:4所示，所述的編號為CL210的正向引物序列如序列表中SEQ ID NO:5所示，所述的編號為CL210的反向引物序列如序列表中SEQ ID NO:6所示，所述的編號為Uni2358的正向引物序列如序列表中SEQ ID NO:7所示，所述的編號為Uni2358的反向引物序列如序列表中SEQ ID NO:8所示，所述的編號為Uni2612的正向引物序列如序列表中SEQ ID NO:9所示，所述的編號為Uni2612的反向引物序列如序列表中SEQ ID NO:10所示，所述的編號為CL248的正向引物序列如序列表中SEQ ID NO:11所示，所述的編號為CL248的反向引物序列如序列表中SEQ ID NO:12所示，所述的編號為Uni20087的正向引物序列如序列表中SEQ ID NO:13所示，所述的編號為Uni20087的反向引物序列如序列表中SEQ ID NO:14所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種燕麥隱性核不育系RI2014不育基因的分子標(biāo)記方法，其特征在于：具體包括以下步驟：

（1）以燕麥品種品燕2號作為父本，以所得到的不育單株RI2014S作為母本，雜交得到F₁代，利用F₁代自交一代得到育性分離的F₂群體, 通過田間性狀調(diào)查表明：不育單株：可育單株分離比為1:3,

（2）提取F₂群體單株總DNA，取10株可育單株的總DNA等量混合作為可育池模板，取10株不育單株的總DNA等量混合作為不育池模板，

（3）采用皮燕麥隱性核不育植株的近等基因系CAMS1進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序開發(fā)的2073對標(biāo)記作為引物，進(jìn)行PCR擴增，

（4）將所得的擴增產(chǎn)物用聚丙烯酰胺凝膠檢測，篩選得到多態(tài)性標(biāo)記；以獲得的多態(tài)性標(biāo)記引物7對，引物編號為CL1155，CL907，CL210，Uni2358，Uni2612，CL248，Uni2008，

（5）以F₂群體全部單株為模板進(jìn)行PCR擴增，將所得產(chǎn)物利用聚丙烯胺凝膠檢測，能夠進(jìn)行擴增的即為含有不育基因的單株，結(jié)合單株表型，將控制RI2014不育系育性性狀的基因定位于染色體23.0Mb區(qū)段內(nèi)。