[發明專利]一種奧貝膽酸的高效液相色譜分析方法

有效

• 申請號: 201910014162.3
• 申請日: 2019-01-08
• 公開（公告）號: CN109655571B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 陳月嫦;謝偉健;姜橋;王標;李冰冰;王龍書
• 申請（專利權）人: 麗珠集團新北江制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強

本發明公開了一種奧貝膽酸的高效液相色譜分析方法，采用電噴霧檢測器(CAD)的反相高效液相色譜法進行檢測，包括以下步驟：a、制備供試品溶液；b、采用帶電噴霧檢測器(CAD)的反相高效液相色譜對供試品溶液進行檢測；其中洗脫采用梯度方式洗脫，流動相A為乙腈，流動相B為甲醇，流動相C為甲酸水溶液或乙酸水溶液中的任意一種。本發明提供的奧貝膽酸的高效液相分析方法，采用電噴霧檢測器(CAD)，檢測靈敏度高，具有簡單、準確、可靠、理論塔板數高等優點，能夠有效測出奧貝膽酸含量。

技術領域

本發明屬于藥物分析檢測領域，涉及一種奧貝膽酸的高效液相色譜分析方法。

背景技術

奧貝膽酸屬法尼醇X受體激動劑，通過活化法尼醇X受體，間接抑制細胞色素7A1(CYP7A1)的基因表達。由于CYP7A1是膽酸生物合成的限速酶，因此奧貝膽酸可以抑制膽酸合成，用于治療原發性膽汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病。其結構式為

奧貝膽酸由美國Intercept制藥公司研發成功，是二十年來首個研發用于治療膽汁淤積性肝病的藥物。研究用于那些對舊標準治療藥物熊去氧膽酸沒有充分應答或不能耐受的患者。安慰劑對照的三期臨床試驗中，奧貝膽酸(OCA)提高了與肝移植風險降低相關的兩個生物標志物的水平。臨床研究的復合終點是堿性磷酸酶至少下降15％，血清堿性磷酸酶的活性低于正常上限的1.67倍，而膽紅素在正常范圍內，堿性磷酸酶是用來表示肝臟疾病嚴重程度的一種生物標記物。

CN106645497A公開了一種奧貝膽酸及其制劑中有關物質的檢測方法，采用高效液相色譜法，使用C18柱；二極管陣列檢測器，柱溫20～30℃；流動相為磷酸鹽緩沖液-乙腈-甲醇溶液，進行等梯度洗脫。該方法中沒有對奧貝膽酸產品定量分析的數據支持。

CN107917972A公開了一種高效液相色譜分析奧貝膽酸及其合成中間體的方法，使用C18柱，示差檢測器；柱溫35～40℃；流動相為磷酸鹽緩沖液-乙腈-甲醇混合溶液，進行等梯度洗脫。該方法主要針對的是其與中間體的分離檢測，并沒有對奧貝膽酸產品進行定量分析。

CN108680696A公開了一種奧貝膽酸起始物料的檢測方法，使用C18柱，電噴霧檢測器，霧化溫度30～80℃；柱溫35～40℃；流動相為A：0.05％三氟乙酸水溶液-B：乙腈混合溶液，進行梯度洗脫，流動相A 0～9min 50％運行，9～12min從50％→20％，運行至15min。該方法主要針對的是奧貝膽酸起始物料的檢測，并沒有對奧貝膽酸產品進行定量分析。

目前奧貝膽酸并沒有統一的質量標準，為了保證奧貝膽酸后續的研究和生產質量，需要對奧貝膽酸原料藥進行質量控制。因此，開發一種穩定性好、重復性好、準確快速的分析方法顯得尤為重要。

發明內容

本發明目的在于提供一種穩定性好、重復性好、操作簡單、理論塔板數高、準確可靠，能夠對奧貝膽酸進行定量分析的高效液相色譜分析方法。

本發明所采取的技術方案是：

一種奧貝膽酸的高效液相色譜分析方法，采用電噴霧檢測器(CAD)的反相高效液相色譜法進行檢測，包括以下步驟：

a、制備供試品溶液；

b、采用帶電噴霧檢測器(CAD)的反相高效液相色譜對供試品溶液進行檢測；

其中洗脫采用梯度方式洗脫，流動相A為乙腈，流動相B為甲醇，流動相C為甲酸水溶液或乙酸水溶液中的任意一種，先使用流動相A和流動相C混合溶液洗脫，然后使用流動相A、流動相B和流動相C混合溶液洗脫，最后再使用流動相A和流動相C混合溶液洗脫。

作為上述前處理方法的進一步改進，流動相C的pH為3.5。

作為上述前處理方法的進一步改進，梯度洗脫程序為：