[發明專利]一種經脛骨內注射制備原位和肺轉移腫瘤模型方法

在審

• 申請號: 201910013611.2
• 申請日: 2019-01-08
• 公開（公告）號: CN111407456A
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 楊燕萍;常君麗;胡少樸
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學附屬龍華醫院
• 主分類號: A61D7/00
• 分類號: A61D7/00
• 代理公司: 上海中優律師事務所 31284
• 代理人: 潘詩孟

本發明公開了一種經脛骨內注射制備原位和肺轉移腫瘤模型方法，裸鼠采用氯胺酮進行麻醉，按100mg/kg的量進行麻醉，5min后即進行手術，(1)使裸鼠左后肢屈曲，脛股骨夾角成45°；(2)Hamilton LT型進樣針配備普通1ml注射器針頭，針頭刺入脛股骨關節間隙，從脛骨頭關節窩凹點處進針，順著脛骨骨干長軸方向緩慢鉆透脛骨頭松質骨部分進人骨髓腔，有明顯的突破感；(3)緩緩注入人肉瘤細胞懸液10μl，約1x10⁵個細胞；(4)拔出針頭，待裸鼠蘇醒后放回籠子。本發明方法制備的原位肺轉移瘤成功率為100％，能模仿臨床骨肉瘤發病和肺轉移病理特征。

技術領域

本發明屬于生物技術領域,具體涉及一種經脛骨內注射制備原位和肺轉移腫瘤模型。

背景技術

骨肉瘤是以類骨質生成為特點的高度惡性骨源性癌癥，是兒童和青少年(15-19歲)最常見原發性惡性骨腫瘤和第二癌癥相關死亡原因。骨肉瘤是骨骼中最常見的原發性惡性腫瘤。通過手術和化療相結合的方案改善了無轉移骨肉瘤患者的生存狀況,5年存活率達到了75％至77％。但這些治療策略對出現轉移的骨肉瘤患者效果有限，而且在過去的30年中沒得到任何改善，具體說，轉移性骨肉瘤的臨床預后仍然不佳，發生轉移的病人初次診斷后5年存活率低于30％，目前預防骨肉瘤轉移和治療轉移性骨肉瘤面臨著嚴峻的挑戰，迫切需要發展治療骨肉瘤的新療法，但現有的針對該腫瘤的可用于開發新療法的關鍵生物學機制數據非常少。

研究骨肉瘤的發病機制，評價抗骨肉瘤療法的效果，均需要借助穩定、重復性好的腫瘤動物模型，但研究者普遍采用將腫瘤細胞經皮下注射到裸鼠體內，制備皮下移植瘤模型。腫瘤皮下移植瘤模型雖然容易復制、成瘤率高，但與臨床發病部位不一致，不能真實反應特定腫瘤的臨床特征，具有一定的缺陷。

脛骨是骨肉瘤好發部位，因此選擇將骨肉瘤細胞經脛骨內注射到裸鼠體內，制備脛骨內原位移植骨肉瘤，更能準確反應骨肉瘤的臨床特征，同時，由于骨肉瘤病人轉移發生最多的是肺轉移，因此通過脛骨內注射獲得原位移植骨肉瘤的同時，能否模擬臨床病人，形成肺轉移也至關重要。

小鼠的脛骨容積很小，注射總體積有限，操作難度大，限制了注射細胞數，且不容易成瘤。

發明內容

針對皮下移植瘤不能反應骨肉瘤臨床特征，在研究骨肉瘤發病機制、評價抗骨肉瘤療效時均需借助更能反應臨床特征的腫瘤動物模型，而小鼠的脛骨容積很小，操作難度大等難度，且不容易成瘤，希望提供一種新型高效經脛骨內注射制備原位和肺轉移腫瘤模型方法。

根據實施例，本發明提供的一種經脛骨內注射制備原位和肺轉移腫瘤模型方法，裸鼠采用氯胺酮進行麻醉，按100mg/kg的量進行麻醉，5min后即進行手術，具體包括如下步驟：

(1)使裸鼠左后肢屈曲，脛股骨夾角成45°；

(2)Hamilton LT型進樣針配備普通1ml注射器針頭，針頭刺入脛股骨關節間隙，從脛骨頭關節窩凹點處進針，順著脛骨骨干長軸方向緩慢鉆透脛骨頭松質骨部分進人骨髓腔，有明顯的突破感；

(3)緩緩注入人肉瘤細胞懸液10μl，約1x 10⁵個細胞；

(4)拔出針頭，待裸鼠蘇醒后放回籠子。

相對于現有技術，用本發明方法制備的原位肺轉移瘤成功率為100％，能模仿臨床骨肉瘤發病和肺轉移病理特征。

附圖說明

圖1是經脛骨內注射制備原位移植骨肉瘤和肺轉移模型方法示意圖。

圖2是經脛骨內注射制備原位移植骨肉瘤和肺轉移模型方法實際操作圖a。

圖3是經脛骨內注射制備原位移植骨肉瘤和肺轉移模型方法實際操作圖b。

圖4經脛骨內注射制備原位移植骨肉瘤和肺轉移模型方法實際操作圖c。