[發明專利]一種抗體偶聯藥物的制備方法

在審

• 申請號: 201910011658.5
• 申請日: 2019-01-07
• 公開（公告）號: CN109692331A
• 公開（公告）日: 2019-04-30
• 發明（設計）人: 程聯勝;趙群;劉兢;張中偉
• 申請（專利權）人: 合肥瀚科邁博生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61P35/00;A61K38/07
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種抗體偶聯藥物的制備方法。該制備方法包括如下步驟：將抗人ErbB2雙特異性抗體和還原劑混合，進行還原反應；取還原后的反應體系，用pH7.4、0.01M的PBS緩沖液稀釋2?4倍，將稀釋液和vc?MMAE混合，進行偶聯反應，得到抗體偶聯藥物。抗人ErbB2雙特異性抗體的重鏈的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，輕鏈的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。實驗證明，抗體偶聯藥物和T?DM1均可抑制SKBR3、NCI?N87、HCC1954、MDA?MB?453和KPL?4的增殖，且抑制效果基本一致；抗體偶聯藥物抑制JIMT?1增殖的效果顯著高于T?DM1。本發明具有重要的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物醫學領域，具體涉及一種抗體偶聯藥物的制備方法。

背景技術

人ErbB2蛋白(簡稱ErbB2，又稱HER2或P185)是一種糖蛋白，屬于I型受體酪氨酸激酶家族中的表皮生長因子受體(ErbB/HER)家族。ErbB2與腫瘤的發生發展密切相關，在多種癌癥(如乳腺癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌)中都可以檢測到ErbB2原癌基因或ErbB2的高表達。同時，ErbB2還經常被用來作為一些腫瘤(如乳腺癌)重要的預后判定指標，ErbB2高表達的腫瘤往往預后效果差。由此可見，ErbB2已經成為腫瘤靶向治療的重要靶點之一。

腫瘤的靶向治療是治療腫瘤的一個重要手段。一個成功的策略是利用單克隆抗體特異性識別腫瘤細胞表面的抗原決定簇，從而靶向殺死癌細胞。據此，可以利用抗體靶向腫瘤細胞表面的ErbB2來特異性的殺死腫瘤細胞。曲妥珠單抗(Trastuzumab，商品名為Herceptin)和帕妥珠單抗(Pertuzumab，商品名Perjeta)均為抗ErbB2人源化單克隆抗體。“曲妥珠單抗與化療聯用”或“曲妥珠單抗與帕妥珠聯用”均能有效治療ErbB2高表達的腫瘤(如乳腺癌)。但是，臨床上曲妥珠單抗的治療方法非常受限，且極易出現原發性或繼發性腫瘤耐藥性以及腫瘤異質性。因此，需要尋找ErbB2高表達的腫瘤的新的治療方法。

將抗腫瘤的單克隆抗體通過化學修飾與小分子毒素偶聯，得到抗體偶聯藥物(ADC)。該抗體偶聯藥物既保留了抗體特異性識別腫瘤抗原的能力，又具有小分子毒素殺傷腫瘤細胞的毒性，因而日益成為抗腫瘤研發領域的熱點。目前市售的抗體偶聯藥物僅有四種，分別為Genentech的Kadcyla(Ado-曲妥珠單抗-emtansine；T-DM1)、Seattle Genetics的Adcetris(brentuximab vedutin)、輝瑞的Mylotarg和Besponsa。由于早期偶聯技術不成熟的原因，這四種抗體偶聯藥物均有一定的局限性。以Kadcyla(又稱T-DM1)為例，T-DM1是曲妥珠單抗與DM1(一種美坦辛衍生物，微管抑制劑)通過一硫醚連接子(MCC)連接而成，主要用于治療HER2陽性的晚期乳腺癌。臨床研究結果表明，與曲妥珠單抗(原裸抗)相比，T-DM1使HER2陽性的晚期乳腺癌患者的生存期幾乎翻倍，盡管二者的臨床條件并不一樣。但是，T-DM1采用的是賴氨酸偶聯的方法，曲妥珠單抗的抗體表面存在大量(超過80個)賴氨酸，加之偶聯反應的非選擇性，因而偶聯數目和位點具有極大的不確定性，導致生成的抗體偶聯藥物不均一，這給抗體偶聯藥物的純化以及之后在體內的藥代動力學帶來了極大的挑戰，在被FDA批準時有一個黑框警告，提醒患者與衛生保健專業人員該藥物可導致肝毒性、心臟毒性和死亡。這主要是脫落的DM1以及T-DM1進入體內降解釋放出DM1引起的。

Monomethyl auristatin E(MMAE)是一種人工合成的具有高毒性的微管蛋白抑制劑，其與海兔毒素類似都能抑制細胞分裂。MMAE與maleimidocaproyl-dipeptide(valine-citrulline or vc)接頭連接后，其毒性是阿霉素的10-1000倍。由于MMAE毒性較高且無選擇性，因此其不能作為藥物單獨進行癌癥治療。

發明內容

本發明的目的在于抑制腫瘤細胞增殖。

本發明首先保護一種抗體偶聯藥物的制備方法，可包括如下步驟：