[發(fā)明專利]利用CRISPR/Cas基因靶向控制生物體表型

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201880083194.2
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN111566208A
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: A·M·沃德;M·M-Y·洛恩;J·F·斯潘葛洛史密斯;G·車諾克斯
• 申請（專利權(quán)）人: 生物輻射實驗室股份有限公司
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;C12N15/09;C12N15/63;C12N15/66;C12N15/73;C12N15/90
• 代理公司: 上海專利商標事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 錢文宇;陳揚揚

1.一種經(jīng)工程改造的細胞，包含：

待被靶向以用于基因改變的內(nèi)源基因或基因組區(qū)域，或含有操作性地連接至啟動子的表型編碼序列的一個或多個異源多核苷酸序列，其中所述表型編碼序列(i)編碼具有可檢測表型的功能性蛋白質(zhì)，或(ii)在蛋白質(zhì)編碼序列中包含工程性破壞，其阻止可檢測表型的表達；和

(a)含有操作性連接至Cas核酸酶編碼多核苷酸的啟動子的異源多核苷酸序列和含有靶向所述內(nèi)源基因、基因組區(qū)域或表型編碼序列的指導(dǎo)RNA(gRNA)的異源多核苷酸序列；和/或(b)含有操作性連接至λ紅編碼多核苷酸的啟動子的異源多核苷酸序列。

2.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)工程改造的細胞，其包含：

待被靶向以用于基因改變的內(nèi)源基因或基因組區(qū)域，或含有操作性地連接至啟動子的表型編碼序列的一個或多個異源多核苷酸序列，其中所述表型編碼序列(i)編碼具有可檢測表型的功能性蛋白質(zhì)，或(ii)在蛋白質(zhì)編碼序列中包含工程性破壞，其阻止可檢測表型的表達；

含有操作性連接至Cas核酸酶編碼多核苷酸的啟動子的異源多核苷酸序列；和

含有靶向內(nèi)源基因、基因組區(qū)域或表型編碼序列的gRNA的異源多核苷酸序列。

3.如權(quán)利要求1或2所述的經(jīng)工程改造的細胞，其包含：

待被靶向以用于基因改變的內(nèi)源基因或基因組區(qū)域，或含有操作性地連接至啟動子的表型編碼序列的一個或多個異源多核苷酸序列，其中所述表型編碼序列(i)編碼具有可檢測表型的功能性蛋白質(zhì)，或(ii)在蛋白質(zhì)編碼序列中包含工程性破壞，其阻止可檢測表型的表達；

含有操作性連接至λ紅編碼多核苷酸的啟動子的異源多核苷酸序列；和

含有供體DNA序列的異源多核苷酸序列。

4.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)工程改造的細胞，其包含含有操作性連接至λ紅編碼多核苷酸的啟動子的異源多核苷酸序列，在或不在含有操作性連接至Cas核酸酶編碼多核苷酸的啟動子的異源多核苷酸序列和含有靶向內(nèi)源基因、基因組區(qū)域或表型編碼序列的gRNA的異源多核苷酸序列的存在下。

5.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)工程改造的細胞，其包含含有操作性連接至Cas核酸酶編碼多核苷酸的啟動子的異源多核苷酸序列和含有靶向內(nèi)源基因、基因組區(qū)域或表型編碼序列的gRNA的異源多核苷酸序列，在或不在含有操作性連接至λ紅編碼多核苷酸的啟動子的異源多核苷酸序列的存在下。

6.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)工程改造的細胞，其包含：

待被靶向以用于基因改變的內(nèi)源基因或基因組區(qū)域，或含有操作性地連接至啟動子的表型編碼序列的一個或多個異源多核苷酸序列，其中所述表型編碼序列(i)編碼具有可檢測表型的功能性蛋白質(zhì)，或(ii)在蛋白質(zhì)編碼序列中包含工程性破壞，其阻止可檢測表型的表達；

含有操作性連接至Cas核酸酶編碼多核苷酸的啟動子的異源多核苷酸序列；

含有靶向內(nèi)源基因、基因組區(qū)域或表型編碼序列的gRNA的異源多核苷酸序列；

含有操作性連接至λ紅編碼多核苷酸的啟動子的異源多核苷酸序列；和

含有供體DNA序列的異源多核苷酸序列。

7.如權(quán)利要求1-6中任一項所述的經(jīng)工程改造的細胞，其包含待被靶向以用于基因改變的內(nèi)源基因或基因組區(qū)域。

8.如權(quán)利要求7所述的經(jīng)工程改造的細胞，其中：

待被靶向以用于基因改變的內(nèi)源基因或基因組區(qū)域是功能性基因或基因組區(qū)域，并且供體DNA序列是破壞功能性基因或基因組區(qū)域的序列；或

待被靶向以用于基因改變的內(nèi)源基因或基因組區(qū)域是功能性基因或基因組區(qū)域，并且供體DNA序列是用不同功能性基因或不同功能性基因組區(qū)域替換功能性基因或基因組區(qū)域的序列；或

待被靶向的內(nèi)源基因或基因組區(qū)域是被破壞的基因或基因組區(qū)域，其中供體DNA序列是恢復(fù)所述基因或基因組區(qū)域功能的序列。