[發明專利]交叉免疫抗原疫苗及其制備方法

在審

• 申請號: 201880082379.1
• 申請日: 2018-12-21
• 公開（公告）號: CN111556896A
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發明（設計）人: 關川賢二
• 申請（專利權）人: 株式會社綠色生物醫藥;麒麟控股株式會社
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;A61K39/12;A61K39/145;A61K39/295;A61P31/14;A61P31/16;C07K14/08;C07K14/11;C07K19/00;C12N15/40;C12N15/44
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 魯雯雯;金龍河

本發明提供一種融合多肽，其為誘導針對病毒的體液免疫反應和細胞免疫反應的融合多肽，其包含下述(a)和(b)的抗原或其片段且具有低聚化活性：(a)含有在該病毒的亞型間保守的B細胞表位的該病毒的抗原或其片段；和(b)含有在該病毒的亞型間保守的T細胞表位的該病毒的抗原或其片段(在此，(a)和/或(b)的抗原或其片段具有低聚化活性，或者該融合多肽除了包含(a)和(b)的抗原或其片段以外還包含(c)具有低聚化活性的多肽)。

技術領域

本發明涉及誘導針對病毒的免疫反應的融合多肽、該融合多肽的多聚體、該融合多肽及其多聚體的藥物用途、該多聚體的制備方法等。

背景技術

針對反復發生抗原突變的病毒和存在多個血清型亞型的病毒進行了各種疫苗的開發。例如，在流感病毒的情況下，存在于流感病毒顆粒的包膜上的HA抗原已作為季節性甲型流感病毒HA裂解疫苗上市。流感病毒HA基因在A亞型間發生遺傳交換，并且通過堿基序列的突變而產生抗原突變，但突變集中地發生在HA蛋白三維結構的頭部。由于HA的頭部是主要的中和抗體表位，因此已上市的HA裂解疫苗和病毒滅活疫苗對新的突變株幾乎沒有效果。另一方面，莖部區的突變少，但免疫原性低，因此未被用作A亞型的疫苗抗原。日本阪大微研的奧野等人在1993年首次報道了能夠交叉中和流感病毒A1型株和A2型株的抗莖部抗體被誘導(非專利文獻1)。另外，該研究組在1996年報道了在用HA基因的頭部區缺失的HA進行了免疫的動物中誘導出能夠中和1型和2型的抗莖部抗體(非專利文獻2)。之后，在全世界進行了利用莖部抗原的萬能疫苗的開發(非專利文獻3、4、5、6)。另一方面，單體(monomer)抗原蛋白的免疫原性低，因此HA裂解疫苗的效果低成為弱點。M.F.Bachmann等人分析了免疫原性與抗原結構的關系，并報道了：高度組織化(多聚化、低聚化)的抗原的免疫原性高、還可以進行記憶B細胞的誘導，因此疫苗抗原的組織化很重要(非專利文獻7、8、9)。據報道，HA與鐵蛋白的融合蛋白利用鐵蛋白的低聚化活性而形成多聚體，由此使HA的免疫原性被強化(非專利文獻10、11)。由流感病毒HA裂解疫苗和滅活疫苗引起的宿主免疫應答主要是通過誘導針對HA抗原的抗體而對病毒進行中和的體液免疫，但另一方面，破壞感染細胞、抑制病毒感染擴大的另一種免疫應答是細胞免疫。現在市售的流感病毒疫苗幾乎不具有細胞免疫誘導能力。據報道，與感染細胞的主要組織相容性抗原I類分子結合而被細胞毒性T細胞(CTL)的T細胞受體識別的流感病毒抗原(CTL表位)位于基質(M1)蛋白和核衣殼(NP)蛋白(非專利文獻12、13、14)。基質(M1)蛋白和核衣殼(NP)蛋白在A亞型間氨基酸序列是保守的，因此交叉細胞免疫在A亞型間成立。M1蛋白具有聚合物(低聚物)形成能力，并且與NP結合(非專利文獻15、16)。甲型流感病毒疫苗的開發狀況參考非專利文獻17、18。

另一方面，在登革病毒的情況下，有4個血清型亞型D1、D2、D3和D4，若感染一個型而誘導出抗體的患者感染另一個型，則抗體會增強二次感染的病毒增殖，引起重度的登革出血熱、登革休克綜合征(非專利文獻19、20)。因此，單純的D1、2、3、4的4價滅活或4價病毒顆粒表面蛋白包膜抗原疫苗由于存在風險而未進行開發。

已經報道了針對流感病毒或登革病毒的各種疫苗(專利文獻1-8)。

如上所述，預測反復發生抗原突變的病毒或存在多個血清型亞型的病毒的流行是困難的，因此尚未開發出充分有效地覆蓋突變體病毒和多個血清型的病毒的疫苗。期望開發出對突變體病毒和大范圍的血清型亞型賦予有效的交叉免疫的抗病毒疫苗。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開2017-19796號公報

專利文獻2：日本特開2017-31225號公報

專利文獻3：日本特開2001-46061號公報

專利文獻4：日本特開2010-268804號公報

專利文獻5：日本特表2013-542224號公報