[發明專利]β-內酰胺酶變體

在審

• 申請號: 201880068725.0
• 申請日: 2018-10-24
• 公開（公告）號: CN111247246A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 讓·德岡茲伯格;簡-丹尼斯·多基耶
• 申請（專利權）人: 達·沃爾泰拉公司;拜爾阿斯特公司
• 主分類號: C12N9/86
• 分類號: C12N9/86;A61K38/00
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 金海霞;劉慧

1.一種具有β-內酰胺酶活性的多肽，其包含與SEQ ID NO：1具有至少70％序列同一性的氨基酸序列，所述多肽：

-在第10和22位中的每個位置處包含替換；

-在第10和34位中的每個位置處包含替換；

-在第10和130位中的每個位置處包含替換；

-在第10、22和34位中的每個位置處包含替換；

-在第10、22和130位中的每個位置處包含替換；

-在第10、34和130位中的每個位置處包含替換；或

-在第10、22、34和130位中的每個位置處包含替換，

其中所述位置對應于在SEQ ID NO：1所表示的序列中的位置，并且其中所述多肽與SEQID NO：1的野生型VIM-2相比在穩定性方面具有改進的性能。

2.根據權利要求1所述的多肽，其包含選自下述的至少一種修飾：

V10A；

Q22H或Q22N；

Q34R；和

E130D。

3.根據權利要求1或2所述的多肽，其中對應于SEQ ID NO：1的第一位殘基的殘基被甲硫氨酸殘基代替。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的多肽，其還包含在N-端末端處的信號肽。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的多肽，其與SEQ ID NO：1中示出的序列相比在N-端或C-端末端處包含截短。

6.根據權利要求5所述的多肽，其包含：

-SEQ ID NO：1的第237-240位殘基的C-端截短；

-SEQ ID NO：1的第236-240位殘基的C-端截短；或

-SEQ ID NO：1的第235-240位殘基的C-端截短。

7.根據權利要求1至5中任一項所述的多肽，所述多肽包含SEQ ID NO：4至23中任一者的氨基酸序列或其具有β-內酰胺酶活性的片段，或由SEQ ID NO：4至23中任一者的氨基酸序列或其具有β-內酰胺酶活性的片段構成。

8.一種分離的核酸序列，其包含編碼根據權利要求1至7中任一項所述的多肽的核酸序列。

9.一種核酸構建物，其包含根據權利要求8所述的核酸序列，所述核酸序列被可操作連接到指導所述多肽在適合的表達宿主中表達的一個或多個控制序列。

10.一種重組宿主細胞，其包含根據權利要求9所述的核酸構建物。

11.一種組合物，其包含根據權利要求1至7中任一項所述的多肽。

12.根據權利要求11所述的組合物，其可口服給藥，并且能夠在腸的所需部分中，特別是在空腸、回腸、盲腸或結腸中釋放出所述多肽。

13.一種試劑盒，其包含：

(a)根據權利要求1至7中任一項所述的多肽或根據權利要求11至12中任一項所述的組合物；和

(b)對(a)的所述多肽或包含在(a)的組合物中的所述多肽敏感的β-內酰胺抗生素；

用于分開、順序或同時給藥。

14.根據權利要求1至7所述的多肽，其用作藥物。

15.根據權利要求1至7中任一項所述的多肽、根據權利要求11至12中任一項所述的組合物、根據權利要求13所述的試劑盒或根據權利要求10所述的重組宿主細胞，其用于在需要的對象中使β-內酰胺抗生素失活的方法中。

16.根據權利要求1至7中任一項所述的多肽、根據權利要求11至12中任一項所述的組合物、根據權利要求13所述的試劑盒或根據權利要求10所述的宿主細胞，其用于治療細菌感染的方法中，其中所述多肽或所述組合物或所述宿主細胞與對所述多肽敏感的β-內酰胺抗生素相組合使用。