[發明專利]來自iPS細胞的具有遺傳多樣性的T細胞群體的制備方法

在審

• 申請號: 201880064382.0
• 申請日: 2018-10-04
• 公開（公告）號: CN111164204A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 安井裕;桂義元;上野博之;金子新
• 申請（專利權）人: 賽雅思株式會社;國立大學法人京都大學
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17;A61K35/545;A61P7/00;A61P35/00;A61P37/04;A61P43/00;C12N5/10;C12N15/09
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 封新琴

[課題]提供通過iPS細胞制備具有遺傳多樣性的再生T細胞群體的方法及相關再生T細胞群體。[解決手段]通過iPS細胞制備具有遺傳多樣性的再生T細胞群體的方法，其包括：(1)自采集的具有遺傳多樣性的T細胞群體，濃縮對于目標組織或抗原具有指向性的T細胞群體的工序，(2)將上述濃縮的T細胞群體重編程為iPS細胞，在維持遺傳多樣性的同時培養iPS細胞的工序，及(3)自上述培養的iPS細胞制備具有遺傳多樣性的再生T細胞群體的工序。

技術領域

本發明涉及制備具有遺傳多樣性的再生T細胞群體的方法及相關再生T細胞群體。

背景技術

T細胞在免疫系統中對于細菌或者病毒等外來病原體或癌細胞等異常細胞起到主要的作用，若出于各種原因導致T細胞功能下降，則認為受試者變得具有易感染性，導致罹患癌癥等。對于此類疾病而言，若能夠補充、再生免疫細胞等，則將成為對于疾病的癥狀改善、治療效果的提高等極為有效的手段。

已提出使用自iPS細胞等多能性干細胞誘導的T細胞進行補充療法。以iPS細胞作為原料，通過使用對于目標抗原具有特異性的T細胞，可制備與原來的T細胞具有相同抗原特異性的再生T細胞(非專利文獻1；本文獻的內容，以其整體引入本說明書中作為參照)。在此方法中，所建立的iPS細胞是以來自單一細胞的細胞群體(集落，colony)為單位進行克隆化的。由此，細胞性狀穩定，向目標細胞、組織的分化效率高，可利用通過基因分析等確認無變異或異常的iPS細胞株。在此，為了確認克隆的質量或對患者的適用性，有必要對克隆逐個檢查，而克隆化一直以來被認為是重要的工序。

另一方面，在使用人及小鼠的研究中，在針對感染性疾病、腫瘤進行T細胞補充療法時，已知通過使用具有遺傳多樣性的T細胞群體的方法可誘導針對目標組織、抗原的多種免疫反應，同時該方法不易受到由于抗原表達低下或變異而產生的免疫逃逸(escape)的影響，因此獲得高的治療效果。

另外，現有技術中，盡管存在向外周血T細胞導入T細胞受體(TCR)、人工抗原受體(嵌合抗原受體：CAR)的基因導入法，但其使用的T細胞所具有的抗原受體的基因序列是單一的。

現有技術文獻

非專利文獻

非專利文獻1：Cell Stem Cell(2013)12(1):114-126

發明概述

發明要解決的課題

現有的利用iPS細胞株的方法中，盡管進行克隆化，但由于克隆化等效于排除選定的克隆以外的其他克隆，使得建立iPS細胞的階段所存在的遺傳多樣性完全喪失。由此，只能利用以單一的抗原表位為對象的免疫反應。然而，以單一的抗原表位為對象的免疫反應中，由于容易受到抗原分子的表達低下或變異等引起的免疫逃逸(escape)的影響，產生了難以獲得高的治療效果的問題。另一方面，在現行的T細胞補充療法中，盡管能夠使用具有遺傳多樣性的T細胞群體，但由于T細胞群體在體外的擴增使得T細胞發生疲勞，產生針對抗原的免疫反應下降的問題。為此，為了能夠用于T細胞補充療法中，期望開發制備具有遺傳多樣性的再生T細胞群體的新的方法。

因此，本發明的課題是提供介由iPS細胞來制備具有遺傳多樣性的再生T細胞群體的方法，以及相關的再生T細胞群體。本發明的另一方面的課題是將通過上述方法能夠獲得的再生T細胞群體用于T細胞補充療法中。另外，本發明的進一步的另一方面的課題是將腫瘤浸潤T細胞用作上述方法的原材料的T細胞群體。

解決課題的手段

本發明的發明人在探討現有方法中的問題時發現，如果介由iPS細胞來制備具有遺傳多樣性的再生T細胞群體，則能夠解決只能利用以單一抗原表位為對象的免疫反應的問題以及T細胞群體的疲勞的問題。即，本發明的要點為：

[1]介由iPS細胞制備具有遺傳多樣性的再生T細胞群體的方法，其包括：