[發(fā)明專利]使用核小體相互作用蛋白結(jié)構(gòu)域來增強(qiáng)靶向基因組修飾在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201880046339.1 | 申請日： | 2018-07-10 |
| 公開（公告）號： | CN111183226A | 公開（公告）日： | 2020-05-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | F.陳;X.丁;Y.馮;G.D.戴維斯 | 申請（專利權(quán)）人： | 西格馬－奧爾德里奇有限責(zé)任公司 |
| 主分類號： | C12N15/90 | 分類號： | C12N15/90;C12N15/85;C12N15/86;C12N15/11;C12N9/96 |
| 代理公司： | 中國專利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 初明明;黃登高 |
| 地址： | 美國密*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 使用 小體 相互作用 蛋白 結(jié)構(gòu) 增強(qiáng) 靶向 基因組 修飾 | ||
1.融合蛋白，其包含與可編程DNA修飾蛋白連接的至少一種核小體相互作用蛋白結(jié)構(gòu)域。
2.權(quán)利要求1的融合蛋白，其中所述至少一種核小體相互作用蛋白結(jié)構(gòu)域是來自高遷移率族(HMG) box (HMGB)蛋白的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述蛋白選自HMGB1、HMGB2或HMGB3；選自HMGN1、HMGN2、HMGN3a、HMGN3b、HMGN4或HMGN5的HMG核小體-結(jié)合(HMGN)蛋白；來自組蛋白H1變體的中央球狀結(jié)構(gòu)域；來自染色質(zhì)重塑復(fù)合物蛋白的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述蛋白選自開關(guān)/蔗糖非發(fā)酵性(SWI/SNF)復(fù)合物、模仿開關(guān)(ISWI)復(fù)合物、克羅莫結(jié)構(gòu)域-解旋酶-DNA結(jié)合(CHD)復(fù)合物、核小體重塑和去乙酰基酶(NuRD)復(fù)合物、INO80復(fù)合物、SWR1復(fù)合物、RSC復(fù)合物，或其組合。
3.權(quán)利要求2的融合蛋白，其中所述至少一種核小體相互作用蛋白結(jié)構(gòu)域是HMGB1 boxA結(jié)構(gòu)域、HMGN1蛋白、HMGN2蛋白、HMGN3a蛋白、HMGN3b蛋白、組蛋白H1中央球狀結(jié)構(gòu)域、ISWI蛋白DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域、CHD1蛋白DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域或其組合。
4.權(quán)利要求1-3中任一項的融合蛋白，其中所述可編程DNA修飾蛋白具有核酸酶活性。
5.權(quán)利要求4的融合蛋白，其中所述可編程DNA修飾蛋白是成簇的規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列(CRISPR)核酸酶或切口酶、鋅指核酸酶(ZFN)、轉(zhuǎn)錄激活物樣效應(yīng)核酸酶(TALEN)、大范圍核酸酶或包含與核酸酶結(jié)構(gòu)域連接的可編程DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的嵌合蛋白。
6.權(quán)利要求1-3中任一項的融合蛋白，其中所述可編程DNA修飾蛋白具有非-核酸酶活性。
7.權(quán)利要求6的融合蛋白，其中所述可編程DNA修飾蛋白是包含與非-核酸酶結(jié)構(gòu)域連接的可編程DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的嵌合蛋白。
8.權(quán)利要求7的融合蛋白，其中所述可編程DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域是經(jīng)修飾以缺少所有核酸酶活性的CRISPR蛋白、鋅指蛋白或轉(zhuǎn)錄激活物-樣效應(yīng)物。
9.權(quán)利要求7的融合蛋白，其中所述非-核酸酶結(jié)構(gòu)域具有乙酰基轉(zhuǎn)移酶活性、去乙酰基酶活性、甲基轉(zhuǎn)移酶活性、去甲基酶活性、激酶活性、磷酸酶活性、泛素連接酶活性、去泛素化活性、腺苷酸化活性、去腺苷酸化活性、SUMO化活性、去SUMO化活性、核糖基化活性、去核糖基化活性、豆蔻酰化活性、去豆蔻酰化活性、瓜氨酸化活性、解旋酶活性、氨基化活性、去氨基化活性、烷基化活性、去烷基化活性、氧化活性、轉(zhuǎn)錄激活活性或轉(zhuǎn)錄阻抑活性。
10.權(quán)利要求9的融合蛋白，其中所述非-核酸酶結(jié)構(gòu)域具有胞嘧啶脫氨酶活性、組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶活性、轉(zhuǎn)錄激活活性或轉(zhuǎn)錄阻抑活性。
11.權(quán)利要求1-10中任一項的融合蛋白，其中所述至少一種核小體相互作用蛋白結(jié)構(gòu)域通過化學(xué)鍵直接、通過接頭間接或其組合，與可編程DNA修飾蛋白連接。
12.權(quán)利要求1-11中任一項的融合蛋白，其中所述至少一種核小體相互作用蛋白結(jié)構(gòu)域與可編程DNA修飾蛋白在其N-末端、C-末端、內(nèi)部位置或其組合連接。
13.權(quán)利要求1-12中任一項的融合蛋白，進(jìn)一步包含至少一種核定位信號、至少一種細(xì)胞-穿透結(jié)構(gòu)域、至少一種標(biāo)記結(jié)構(gòu)域或其組合。
14.融合蛋白，其包含與至少一種核小體相互作用蛋白結(jié)構(gòu)域連接的成簇的規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列(CRISPR)蛋白。
15.權(quán)利要求14的融合蛋白，其中所述CRISPR蛋白是II型CRISPR/Cas9核酸酶或切口酶，或者所述CRISPR蛋白是V型CRISPR/Cpf1核酸酶或切口酶。
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