[發明專利]微小物質檢測方法及微小物質檢測用裝置

在審

• 申請號: 201880021722.1
• 申請日: 2018-03-28
• 公開（公告）號: CN110476067A
• 公開（公告）日: 2019-11-19
• 發明（設計）人: 野地博行;小野堯生;皆川慶嘉
• 申請（專利權）人: 國立研究開發法人科學技術振興機構
• 主分類號: G01N35/08
• 分類號: G01N35/08;G01N1/00;G01N21/78;G01N33/483;C12M1/34;C12Q1/06;C12Q1/70
• 代理公司: 11021 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 張國梁;張瑩<國際申請>=PCT/JP2

本發明提供：作為能夠利用簡易操作將核酸、蛋白質、病毒及細胞等檢測對象物質封入極小容積的液滴中進行高靈敏度檢測的技術，檢測容納于互相分開形成的多個容器內的微小物質的方法，其包括：(1)將包含上述微小物質的溶劑導入到下層部與上層部之間的空間的步驟，所述下層部中形成有所述容器，所述上層部與所述下層部中形成所述容器的面相對；以及(2)將氣體導入上述空間，在上述容器內形成包含上述微小物質的溶劑的液滴的步驟；以及(3)光學、電和/或磁性檢測在上述液滴內存在的上述微小物質的步驟。

技術領域

本發明涉及微小物質檢測方法及微小物質檢測用裝置。更具體而言，涉及在基板上互相分開形成的多個容器內形成封入微小物質的微小的液滴，光學、電和/或磁性檢測該液滴內存在的微小物質的方法等。

背景技術

為了進行疾病、傳染病等的診斷，因此，要求用于迅速、簡便，且高靈敏度地檢測核酸、蛋白質、病毒及細胞等的標記的技術。例如，從在體積1mm³的腫瘤中包含的100萬個癌癥細胞將標記蛋白(從各細胞各100分子)分泌到5L的血中的情況下，標記蛋白的血中濃度為30aM左右。要求對這樣的濃度非常低的物質也能夠檢測的技術。

作為這樣的技術，存在“單分子酶測定”：其將核酸、蛋白質、病毒及細胞等檢測對象物質封入極小容積的液滴中，通過使用了標記抗體的免疫學手段進行檢測。利用單分子酶測定，能夠將檢測對象物質以一分子單位的靈敏度進行檢測。

在專利文獻1中，作為能夠應用于單分子酶測定的技術，公開了“一種顆粒封入方法，其特征在于包括：顆粒導入步驟，其是向下層部與上層部之間的空間導入包含顆粒的親水性溶劑，該下層部中形成有多個僅可以收容1個所述顆粒的收容部，多個所述收容部被具有疏水性的上表面的側壁互相隔開，該上層部與該下層部的形成有所述收容部的面相對向；疏水性溶劑導入步驟，其在所述顆粒導入步驟之后向所述空間導入疏水性溶劑”。

專利文獻1所公開的技術，使用了“一種陣列，其特征在于：其具備下層部及上層部，所述下層部中形成有多個收容部，該多個收容部被具有疏水性的上表面的側壁互相隔開，所述上層部與所述下層部的形成有所述收容部的面以隔著空間的方式而相對向”，其使用的是具有下層部和上層部隔著空間相對的流通池結構的陣列。根據該技術，認為“可以將大量顆粒高效地封入陣列中，因此能夠以高靈敏度檢測出低濃度的靶分子”。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：國際公開2012/121310號

專利文獻2：日本特開2004-309405號

發明內容

發明所要解決的問題

本發明的主要目的在于提供用于利用簡易的操作，將核酸、蛋白質及病毒等檢測對象物質封入極小容積的液滴中，能夠進行高靈敏度的檢測的技術。

解決問題的方法

為了解決上述課題，本發明提供以下[1]～[20]。

[1]檢測微小物質的方法，所述微小物質容納于互相分開形成的多個容器內，其包括：

(1)將包含上述微小物質的溶劑導入到下層部與上層部之間的空間的步驟，所述下層部中形成有所述容器，所述上層部與所述下層部中形成所述容器的面相對，以及

(2)將氣體導入上述空間，在上述容器內形成包含上述微小物質的溶劑的液滴的步驟，以及

(3)光學、電和/或磁性檢測在上述液滴內存在的上述微小物質的步驟。

[2]基于生色底物的吸光度變化和/或熒光的光學檢測微小物質的方法，所述微小物質容納于互相分開形成的多個容器內，其包括：