[發(fā)明專利]一種適合質(zhì)譜檢測(cè)的樣本前處理組合物、樣本前處理方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811646570.2
• 申請(qǐng)日: 2018-12-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111381043B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李艷召;王秀利;王杰;許彬;林長(zhǎng)青
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京舜景生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 北京悅和知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11714
• 代理人: 田昕

1.一種適合質(zhì)譜檢測(cè)的樣本前處理組合物，其由以下組件構(gòu)成：

偶聯(lián)有凝集素的載體和洗脫液，所述偶聯(lián)有凝集素的載體用于特異性分離待測(cè)樣本中的目標(biāo)糖基化蛋白，所述洗脫液用于洗脫偶聯(lián)有凝集素的載體上吸附的目標(biāo)糖基化蛋白；其中：偶聯(lián)有凝集素的載體包括磁珠；所述洗脫液包括分析純級(jí)以上的甲酸銨、乙酸銨、甲酸、乙酸、氨水、碳酸氫銨、碳酸銨、乙腈中的任意一種的水溶液或兩種以上的混合水溶液；

清洗液，用于清洗偶聯(lián)有凝集素的載體上非特異性吸附的其他雜質(zhì)；

人血白蛋白抗體-載體復(fù)合物，用于去除洗脫液中因非特異性結(jié)合而殘留的微量人血白蛋白；每1000ml人血白蛋白抗體-載體復(fù)合物上至少偶聯(lián)有1mg人血白蛋白抗體；

所述偶聯(lián)有凝集素的載體由以下載體構(gòu)成：偶聯(lián)有小扁豆凝集素的載體、偶聯(lián)有蕓豆凝集素的載體、偶聯(lián)有刀豆凝素A的載體和偶聯(lián)有蝸牛凝集素的載體；偶聯(lián)有小扁豆凝集素、蕓豆凝集素、刀豆凝集素A和蝸牛凝集素的4種載體之間的體積比為1-2:1-2:1-2:1-2；

所述待測(cè)樣本為人血清、血漿中的任意一種樣本類型；

所述目標(biāo)糖基化蛋白為：用于肝癌診斷的核心巖藻糖基化糖鏈結(jié)構(gòu)異常蛋白AFP-L3、用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎早期診斷的IgG糖鏈結(jié)構(gòu)異常蛋白IgG0、用于IgA腎病診斷的IgA糖鏈結(jié)構(gòu)異常蛋白IgA1、用于妊娠反應(yīng)和腫瘤標(biāo)志物診斷的人絨毛膜促性腺激素HCG中的一種、兩種、三種或四種；

其中：使用所述樣本前處理組合物步驟為：

使用樣本前處理組合物中的偶聯(lián)有凝集素的載體分離待測(cè)樣本中的目標(biāo)糖基化蛋白；

使用樣本前處理組合物中的清洗液，清洗偶聯(lián)有凝集素的載體上非特異性吸附的其他雜質(zhì)；

使用樣本前處理組合物中的洗脫液，洗脫偶聯(lián)有凝集素的載體上特異性吸附的糖基化蛋白的步驟；

使用樣本前處理組合物中的人血白蛋白抗體-載體復(fù)合物去除洗脫液中因非特異性結(jié)合而殘留的微量人血白蛋白（HSA）；

所述洗脫液洗脫獲得的目標(biāo)糖基化蛋白溶液直接用于質(zhì)譜檢測(cè)分析。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述樣本前處理組合物，其特征在于，每1ml偶聯(lián)有凝集素的載體上偶聯(lián)有凝集素1-30mg。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述樣本前處理組合物，其特征在于，偶聯(lián)有凝集素的載體中磁珠的粒徑分布范圍為0.1μm-200μm。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述樣本前處理組合物，其特征在于，偶聯(lián)有凝集素的載體中磁珠的粒徑分布范圍為1μm-200μm或20μm-200μm。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述樣本前處理組合物，其特征在于，偶聯(lián)有凝集素的載體中所述磁珠包括表面經(jīng)高分子材料處理形成的復(fù)合磁珠。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述樣本前處理組合物，其特征在于，所述高分子材料為環(huán)氧樹(shù)脂、聚苯乙烯、纖維素中的任意一種，或者任意兩種或兩種以上高分子材料的復(fù)合物。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述樣本前處理組合物，其特征在于，所述偶聯(lián)有凝集素的載體通過(guò)包括以下步驟的方法獲得：將除去保存液后并清洗干凈的磁珠與凝集素混合，震蕩反應(yīng)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述樣本前處理組合物，其特征在于，每1ml磁珠要加入1-30mg凝集素。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述樣本前處理組合物，其特征在于，偶聯(lián)有凝集素的載體中所述磁珠為表面經(jīng)瓊脂糖處理形成的瓊脂糖磁珠。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述樣本前處理組合物，其特征在于，震蕩反應(yīng)的條件為在0.1-1M、 pH 6-7、含0.1-0.5M NaCl的MES緩沖液，室溫條件下震蕩反應(yīng)0.5-5h。

11.根據(jù)權(quán)利要求1所述樣本前處理組合物，其特征在于，所述洗脫液為乙酸銨水溶液。

12.根據(jù)權(quán)利要求1所述樣本前處理組合物，其特征在于，所述洗脫液的濃度為0.01%-1%。