[發(fā)明專利]檢測(cè)多種病原體的核酸組合物、試劑盒及試劑盒的使用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811643121.2
• 申請(qǐng)日: 2018-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN109680081B
• 公開（公告）日: 2022-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅成
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市剛竹醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;C12R1/445;C12R1/44;C12R1/45;C12R1/385;C12R1/22;C12R1/19;C12R1/37;C12R1/72;C12R1/74
• 代理公司: 華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 潘霞

1.一種檢測(cè)多種病原體的試劑盒，其特征在于，包括檢測(cè)多種病原體的核酸組合物和PCR緩沖液，所述核酸組合物包括擴(kuò)增引物對(duì)及與所述擴(kuò)增引物對(duì)應(yīng)的檢測(cè)探針；

所述擴(kuò)增引物對(duì)包括如下擴(kuò)增引物對(duì)：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示的鮑式不動(dòng)桿菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.3及SEQ ID No.4所示的金黃色葡萄球菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.5及SEQ ID No.6所示的凝固酶陰性葡萄球菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQID No.7及SEQ ID No.8所示的表皮葡萄球菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.9及SEQ IDNo.10所示的綠膿假單胞菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.11及SEQ ID No.12所示的肺炎克雷伯菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.13及SEQ ID No.14所示的糞腸球菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.15及SEQ ID No.16所示的屎腸球菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.17及SEQ ID No.18所示的大腸桿菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.19及SEQ ID No.20所示的陰溝腸桿菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.21及SEQ ID No.22所示的奇異變形桿菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.23及SEQ ID No.24所示的白色念珠菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ IDNo.25及SEQ ID No.26所示的嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.27及SEQID No.28所示的光滑假絲酵母擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.29及SEQ ID No.30所示的近平滑念珠菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.31及SEQ ID No.32所示的熱帶念珠菌擴(kuò)增引物對(duì)、序列如SEQ ID No.33及SEQ ID No.34所示的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌擴(kuò)增引物對(duì)、和序列如SEQ ID No.35及SEQ ID No.36所示的鮑式不動(dòng)桿菌耐藥菌擴(kuò)增引物對(duì)；

所述擴(kuò)增引物對(duì)為六組；其中，第一組包括所述鮑式不動(dòng)桿菌擴(kuò)增引物對(duì)、所述糞腸球菌擴(kuò)增引物對(duì)和所述嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌擴(kuò)增引物對(duì)；第二組包括所述金黃色葡萄球菌擴(kuò)增引物對(duì)、所述屎腸球菌擴(kuò)增引物對(duì)和所述光滑假絲酵母擴(kuò)增引物對(duì)；第三組包括所述凝固酶陰性葡萄球菌擴(kuò)增引物對(duì)、所述大腸桿菌擴(kuò)增引物對(duì)和所述近平滑念珠菌擴(kuò)增引物對(duì)；第四組包括所述表皮葡萄球菌擴(kuò)增引物對(duì)、所述陰溝腸桿菌擴(kuò)增引物對(duì)和所述熱帶念珠菌擴(kuò)增引物對(duì)；第五組包括所述綠膿假單胞菌擴(kuò)增引物對(duì)、所述奇異變形桿菌擴(kuò)增引物對(duì)和所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌擴(kuò)增引物對(duì)；第六組包括所述肺炎克雷伯菌擴(kuò)增引物對(duì)、所述白色念珠菌擴(kuò)增引物對(duì)和所述鮑式不動(dòng)桿菌耐藥菌擴(kuò)增引物對(duì)；

與所述擴(kuò)增引物對(duì)對(duì)應(yīng)的檢測(cè)探針的序列或其互補(bǔ)序列分別如SEQ ID No.37～SEQID No.54所示，檢測(cè)探針上有熒光基團(tuán)；

所述PCR緩沖液與所述核酸組合物混合形成反應(yīng)液，其中，所述反應(yīng)液中核酸樣本的DNA的濃度為10ng～100ng；所述反應(yīng)液中每個(gè)擴(kuò)增引物對(duì)的上游引物和下游引物的終濃度分別為0.1μM～0.5μM和0.1μM～0.5μM；反應(yīng)液中每個(gè)擴(kuò)增引物對(duì)對(duì)應(yīng)的檢測(cè)探針的終濃度為0.1μM～0.5μM；所述反應(yīng)液還包括50mM～150mM的Tris-HCl、30mM～60mM的(NH4)₂SO₄、5mM～10mM的MgSO₄、體積百分含量為5％～10％的甘油、體積百分含量為0.66％～1％的牛血清白蛋白、體積百分含量為0.12％～0.5％的乙基苯基聚乙二醇、體積百分含量為0.05％～0.2％的吐溫20、100mM～150mM的KCl、4mM～6mM的MgCl₂、1mM～2mM的二硫蘇糖醇、體積百分含量為3％～6％的DMSO、80μg/mL～100μg/mL的牛凝血酶和0.4mM～0.8mM的dNTPs。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)多種病原體的試劑盒，其特征在于，各組內(nèi)的各所述檢測(cè)探針上的熒光基團(tuán)選自FAM、HEX、VIC、CY5及ROX中的一種。