[發明專利]快速檢測GFAP的熒光免疫層析試紙條及其制備與應用

在審

• 申請號: 201811639111.1
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109633171A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 胡小龍;周麗;朱凱
• 申請（專利權）人: 上海八通生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/533;G01N33/543
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 褚明偉

本發明涉及一種快速檢測GFAP的熒光免疫層析試紙條及其制備與引用，快速檢測GFAP的熒光免疫層析試紙條包括底板，沿底板長度依次設置的樣品墊、結合物釋放墊、層析膜及吸水墊，所述的層析膜上設有檢測線與質控線，所述的檢測線與質控線相互分離，所述的結合物釋放墊上固定有熒光微球標記GFAP單克隆抗體的熒光探針，所述檢測線處包被有與微球標記抗體配對的GFAP抗原，所述的質控線處包被有羊抗鼠IgG抗體。與現有技術相比，本發明通過制備GFAP重組抗原和單克隆抗體，結合時間分辨熒光側向免疫層析技術，制備了快速檢測GFAP的熒光免疫層析試紙條，并建立了一種快速檢測血清中腦損傷標志物GFAP的方法，能夠快速、定量檢測人血清中GFAP的濃度。

技術領域

本發明屬于熒光免疫檢測技術領域，尤其是涉及一種快速檢測GFAP的熒光免疫層析試紙條及其制備與應用。

背景技術

創傷性腦損傷(traumatic brain injury，TBI)是神經外科中最常見的疾病，是世界范圍內主要的死亡及致殘因素之一；其發生率及病死率位居第三位，僅次于癌癥和心血管疾病；在外傷性死亡原因中占首要位置。TBI按照發生的順序可分為原發性腦損傷和繼發性腦損傷。原發性腦損傷指暴力直接或間接作用于頭部時立即發生的損傷，病理改變包括挫傷、裂傷、出血等。繼發性腦損傷指受傷后出現的腦損傷病變，涉及細胞、分子等方面的改變，可能發生缺血、缺氧、水腫、炎癥等病理改變。繼發性腦損傷是多種細胞因子和生化物質共同參與的損傷與抗損傷的病理生理過程。

雖然近年來現代影像學技術極大地提高了對TBI的診療水平和能力，但它仍然難以全面、動態評估TBI過程中腦細胞損傷情況。最新研究表明，選擇其中具有高度特異性和敏感性的細胞因子和生化物質作為監測顱腦損傷的生物標志物，可以在一定程度上反映顱腦損傷程度及損傷后經過時間。生物標志物一般是指可供客觀測定和評價的一個普通生理或病理或治療過程中的某種特征性的生化指標，通過對它的測定可以獲知機體當前所處的生物學過程中的進程。檢查一種疾病特異性的生物標志物，對于疾病的鑒定、早期診斷及預防、治療過程中的監控可能起到幫助作用。TBI發生后通常伴隨著顱內血管內膜損傷和血腦屏障的破壞，造成神經元、神經膠質細胞、微血管的不可逆傷害。膠質纖維酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein，GFAP)作為星形膠質細胞的標志性蛋白之一，表達于發育成熟的膠質細胞中，對膠質細胞損傷有著高度的敏感性和特異性，膠質細胞發生損傷后其表達可迅速發生變化。

膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)在1971年被Eng等首次成功分離，是一種分子量約為50～53kDa的酸性蛋白，是星形膠質細胞特有的骨架蛋白。大量的GFAP單體聚合形成星形膠質細胞的細胞骨架，并以可溶性蛋白和中間絲蛋白兩種形式存在于神經膠質細胞的胞質中。GFAP由8個不同亞基組成，其基因由9個外顯子和8個內含子組成，再加上4個選擇性外顯子和2個選擇性內含子DNA，從而形成一個大小約為10kb的DNA片段。GFAP在人腦中最早出現于胚胎發育的第8周，逐漸表達于膠質細胞中，主要表達于星形膠質細胞中，而在室管膜細胞、少突膠質細胞等膠質細胞也有分布。GFAP是星形細胞中主要的單體中間絲蛋白，是中樞神經系統所獨有的特異性細胞骨架蛋白，是星形細胞的標志性蛋白。