[發(fā)明專利]一種發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811628626.1
• 申請(qǐng)日: 2018-12-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109593797A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 柯永中;陸克文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海邦成生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C12P13/00
• 分類號(hào): C12P13/00;C12N1/20;C12R1/19
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 俞滌炯

1.一種發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，包括大腸桿菌菌種活化、種子液進(jìn)行入罐接種、發(fā)酵培養(yǎng)；

其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)采用的發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下組分及含量：酵母浸粉15-30g/L；蛋白胨10-20g/L；L-谷氨酸鈉0.1-0.5g/L；甘油1-6g/L；三氯化鐵0.5-1g/L。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)包括：清洗發(fā)酵罐；空罐滅菌；將種子液移入發(fā)酵罐，并進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)；培養(yǎng)物進(jìn)行分離、純化獲得γ-氨基丁酸制品。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，在發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中的誘導(dǎo)培養(yǎng)采用如下組分：維生素B6 0.5-1mmol/L；PLP 20-30g/L；乳糖1-3g/L；IPTG 5-12g/L；所述發(fā)酵培養(yǎng)基中還加入分消后的磷酸二氫鉀15-25g/L；磷酸氫二鉀90-120g/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述發(fā)酵罐用培養(yǎng)基的PH為4.5-8。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述大腸桿菌菌種活化包括：制備活化用培養(yǎng)基，滅菌倒平板，凝固備用，制得菌種活化平板；制備接種用培養(yǎng)基，滅菌，挑取生長(zhǎng)正常旺盛的單一菌落至接種用培養(yǎng)基內(nèi)接種，制備種子液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述活化用培養(yǎng)基的組成為：氯化鈉5-12g/L；酵母浸粉3-10g/L；蛋白胨5-15g/L；瓊脂粉3-10g/L；所述接種用培養(yǎng)基的組成為：氯化鈉5-12g/L；酵母浸粉3-10g/L；蛋白胨3-8g/L；其中，所述活化用培養(yǎng)基和接種用培養(yǎng)基的PH均為5.1-7.2，培養(yǎng)溫度均為30℃-38℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述種子液進(jìn)行入罐接種包括：種子罐實(shí)罐滅菌，取出種子液進(jìn)行鏡檢、PH、OD值測(cè)定，各指標(biāo)正常，入種子罐接種。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的1所述的一種發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述種子液入罐前在600nm條件下測(cè)定的OD值為0.8-2.5，利用PH測(cè)定儀直接測(cè)定的PH值為5-8。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的1所述的一種發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述種子罐用培養(yǎng)基的組成為：酵母浸粉15-30g/L；蛋白胨10-20g/L；氯化鈉：5-12g/L；甘油1-6g/L；三氯化鐵0.5-1g/L。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的的一種產(chǎn)γ-氨基丁酸的高效發(fā)酵法，其特征在于，所述種子罐用培養(yǎng)基的PH為5-8。