[發(fā)明專利]一種測(cè)定總膽汁酸的試劑盒及方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811626429.6
• 申請(qǐng)日: 2018-12-28
• 公開（公告）號(hào): CN109613227A
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高國(guó)華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海高蹤醫(yī)療器械科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/52
• 分類號(hào): G01N33/52
• 代理公司: 北京君泊知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11496
• 代理人: 王程遠(yuǎn)

本發(fā)明公開了一種測(cè)定總膽汁酸的試劑盒及方法，試劑盒包括第一試劑，所述第一試劑包括：甘氨酸、三乙醇胺、ProClin150、甘露醇和Thio?NAD；方法包括以下步驟：1)按原料組分及含量分別溶解第一試劑和第二試劑；2)將溶解的第一試劑加入待測(cè)樣品中；3)加入溶解的第二試劑；4)測(cè)定溶液中Thio?NADH的吸光度；本發(fā)明提供了一種精密度、準(zhǔn)確性均較高且穩(wěn)定的測(cè)定總膽汁酸的試劑盒及方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種測(cè)定總膽汁酸的試劑盒及方法。

背景技術(shù)

總膽汁酸(total bile acid，TBA)是膽固醇在肝臟分解及腸-肝循環(huán)中的一組代謝產(chǎn)物，是膽固醇在肝臟分解代謝的最終產(chǎn)物，與膽固醇的吸收、代謝及調(diào)節(jié)關(guān)系密切。人體的總膽汁酸分為初級(jí)膽汁酸和次級(jí)膽汁酸兩大類。初級(jí)膽汁酸以膽固醇為原料，參與脂肪的消化吸收。其經(jīng)過(guò)膽道系統(tǒng)進(jìn)入十二指腸后，在腸道細(xì)菌作用下經(jīng)水解反應(yīng)生成次級(jí)膽汁酸。當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生病變或肝內(nèi)外阻塞時(shí)，膽汁酸代謝發(fā)生障礙反流入血，血清總膽汁酸濃度升高。因此，總膽汁酸水平變化可敏感地反映肝臟功能。血清總膽汁酸是肝實(shí)質(zhì)性損傷及消化系統(tǒng)疾病的一個(gè)較為靈敏的診斷指標(biāo)?？偰懼崮茌^為特異地反映肝排泄功能，一旦肝細(xì)胞有病變或腸-肝循環(huán)障礙，均可引起總膽汁酸升高。

血清總膽汁酸增高:可見于各種急慢性肝炎、乙肝攜帶者或酒精性肝炎(TBA對(duì)檢出輕度肝病的靈敏度優(yōu)于其他所有肝功能試驗(yàn))，還可見于絕大部分肝外膽管阻塞和肝內(nèi)膽汁淤積性疾病、肝硬化、阻塞性黃疸等。

在眾多的總膽汁酸(TBA)檢測(cè)試劑盒中，主要有以下幾種方法：

1.氣液色譜法測(cè)定血清膽汁酸的改進(jìn)Sep-Pak C_(18)Cartridge小柱對(duì)血清膽汁酸作液固萃取,以具有去結(jié)合作用的七氟丁酐作衍生化試劑,快速而精密地測(cè)定血清中膽酸、鵝去氧膽酸、去氧膽酸、石膽酸和熊去氧膽酸五種膽汁酸的填充柱氣液色譜分析法。

2.酶學(xué)偶聯(lián)測(cè)定方法第三代試劑原理，是血清中總膽汁酸在NAD+存在下，3α-HSD作用于3-α羥基生成中間產(chǎn)物3-酮類固醇，NAD+被還原為NADH。在黃素酶的存在下，NADH氧化為NAD+，而共存的NBT還原為甲潛衍生物。甲潛衍生物的生成量與血清中總膽汁酸含量成正比。

3.第四代試劑原理，膽汁酸被3α羥基類固醇脫氫酶(3a-HSDH)及口-硫代煙酰胺嘌呤二核苷酸氧化型特異性的氧化，生成3酮類固醇及}硫代煙酰胺嘌呤二核苷酸還原型。此外，生成的3酮類固醇在3α羥基類固醇脫氫酶及β硫代煙酰胺嘌呤二核苷酸還原型存在下，生成膽汁酸及β煙酰胺嘌呤二核苷酸氧化型。以上依據(jù)循環(huán)酶而放大量的膽汁酸測(cè)定生成的β-硫代煙酰胺嘌呤二核苷酸還原型的吸光度，計(jì)算血清中膽汁酸的量。

在上述的3種方法中都存在著精密度、準(zhǔn)確性、線性范圍等方面的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了精密度、準(zhǔn)確性均較高且穩(wěn)定的測(cè)定總膽汁酸的試劑盒及方法。

本發(fā)明的第一個(gè)方面，一種測(cè)定總膽汁酸的試劑盒，包括第一試劑，所述第一試劑包括：甘氨酸、三乙醇胺、ProClin150、甘露醇和Thio-NAD。

優(yōu)選地，所述甘露醇在所述第一試劑中含量為0.1-1％。

優(yōu)選地，所述Thio-NAD在所述第一試劑中的含量為0.9-1g/L。

優(yōu)選地，還包括第二試劑，所述第二試劑包括：三氨基甲烷、吐溫80、ProClin150、牛血清白蛋白、還原性輔酶Ⅰ、3α-羥基類固醇脫氫酶、過(guò)氧化氫酶和超氧化物歧化酶。

優(yōu)選地，所述吐溫80在所述第二試劑中的含量為0.3-0.8mmol/L。

優(yōu)選地，所述3α-羥基類固醇脫氫酶在所述第二試劑中的含量為7-10Ku/L。