[發明專利]利用HIF2α mRNA相對于Caspase-3的表達量推斷死亡時間的方法和應用

在審

• 申請號: 201811617434.0
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN109852700A
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發明（設計）人: 梁偉波;張林;彭鐸;李芝隆;田歡;龍兵;金波;呂梅勵
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 何凡;郭艷艷

本發明公開了一種利用HIF2αmRNA相對于Caspase?3的表達量推斷死亡時間的方法和應用。該引物序列見SEQ ID NO.1～4；該方法包括以下步驟：(1)提取待檢樣本死后不同時間點的組織，并進行RNA、DNA共提取，然后逆轉錄制備cDNA；(2)檢測每個時間點中HIF2αmRNA與Caspase?3 DNA的表達量；(3)計算每個死亡時間點中HIF2αmRNA相對于Caspase?3 DNA的表達量，建立回歸曲線，得出推斷死亡時間的方程。本發明能夠精確的推斷出死者的死亡時間，有助于案件的偵破。

技術領域

本發明屬于法醫檢測技術領域，具體涉及一種利用HIF2α mRNA相對于Caspase-3的表達量推斷死亡時間的方法和應用。

背景技術

死亡時間的推斷在法醫學實踐中至關重要，可鎖定案發時間，有助于案件的偵破。關于死亡時間的推斷，法醫實踐常用的方法為利用尸體內部的溫度，并且聯合尸斑尸僵的情況推斷。這種推斷死亡時間的方法受較多環境溫度濕度、年齡、疾病等因素的影響。

而死亡后尸體中的離子濃度，例如玻璃體液中鉀離子(K+)濃度，也可用于死亡時間的推斷，但是這種檢測鉀離子濃度的準確性因方法不同而產生差異。由于核酸受外界影響較小，根據核酸，如DNA、RNA，在死后尸體中含量的變化，共同推斷死亡時間成為法醫學的研究熱點，但目前尚未見相關報道，因此找到DNA、RNA在死后的變化規律成為利用核酸進行死亡時間推斷的重要部分。

發明內容

針對現有技術中的上述不足，本發明提供一種利用HIF2α mRNA相對于Caspase-3的表達量推斷死亡時間的方法和應用，可精準的確定死者的死亡時間。

為實現上述目的，本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種引物，該引物包括缺氧誘導因子HIF2α的mRNA的引物，其片段長度為79bp；以及Caspase-3 DNA的引物，其片段長度為157bp，具體序列如下：

HIF2α mRNA-F：GGGACGGTCATCTACAAC；(SEQ ID NO.1)

HIF2α mRNA-R：TCTCGATCTCACTCAGCA；(SEQ ID NO.2)

Caspase-3 DNA-F：ATGTGGGGCCATCGTTACAG；(SEQ ID NO.3)

Caspase-3 DNA-R：CACCAGGTTGTCACAGGGTT。(SEQ ID NO.4)

一種利用HIF2α mRNA相對于Caspase-3的表達量推斷死亡時間的方法，包括以下步驟：

(1)提取待檢樣本死后不同時間點的組織，并進行RNA、DNA共提取，然后逆轉錄制備cDNA；

(2)以cDNA為模板，采用上述引物，通過RT-qPCR檢測HIF2α mRNA與Caspase-3 DNA的表達量；

(3)計算每個死亡時間點中HIF2α mRNA相對于Caspase-3 DNA的表達量，然后建立相對表達量與死亡時間的回歸曲線，并得出推斷死亡時間的方程。

進一步地，步驟(1)中的組織為腦組織。

進一步地，腦組織提取的具體過程為：在待檢樣本死亡后，每隔0.5h收集一次待檢樣本腦組織。

進一步地，步驟(1)中逆轉錄反應體系為：逆轉錄酶1μL、隨機引物0.5μL、dNTPs預混液1μL、反應緩沖液2μL、共提取液1μL，最后用RNase-free水補足至10μL。

進一步地，步驟(1)中逆轉錄反應條件為：25℃5min；60℃42min；70℃5min。