[發明專利]人β2

有效

• 申請號: 201811616680.4
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN109725159B
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 馬永;丁娜
• 申請（專利權）人: 江蘇眾紅生物工程創藥研究院有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C12N15/81;C07K16/28
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及人β₂?微球蛋白定量檢測卡。本發明制備了多種抗體，并進行配對篩選，獲得靈敏度及特異性均能滿足定量檢測卡需求的一組抗體組合(BM12和BM17)；同時其方便大量生產，可滿足日后大規模臨床應用的需求。對上述抗體組合進行檢測體系的調試優化工作，獲得操作簡便，靈敏度，特異性及相關檢測性能可滿足人血液或尿液樣本檢測的人β₂?微球蛋白的膠體金免疫層析定量檢測卡。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體的涉及兩種抗人β₂-微球蛋白抗體及其制備方法以及上述抗體在人β₂-微球蛋白定量檢測中的應用。

背景技術

β₂-微球蛋白(β₂-microglobulin，β₂-MG)是一種由淋巴細胞、血小板、多形核白細胞產生的一種內源性小分子球蛋白，分子量為11.8kDa；由99個氨基酸組成的單鏈多肽，在免疫應答中起重要作用；是細胞表面人白細胞抗原的β鏈部分，分子內含有二硫鍵，不含糖，與免疫球蛋白的結構相似。

β₂-MG廣泛存在于血漿、尿液、腦脊液、唾液以及初乳中。血清β₂-MG的合成速度和細胞膜釋放的量是非常恒定的，從而使β₂-MG含量保持穩定水平。正常人β₂-MG可以從腎小球自由濾過，99.9％在近端腎小管吸收并在腎小管上皮細胞中分解破壞，因此正常尿液中排出量很微量。在腎小球濾過功能受損或濾過負荷增加的情況下，血液中的β₂-MG含量增加；而尿液中排出的β₂-MG含量增加，則提示腎小管損害或濾過負荷增加。對于腎移植病人，β₂-MG檢測則可預示機體是否發生排斥反應。尿β₂-MG還有助于鑒別上、下尿路感染。綜上所述，β₂-MG是一種具有較高臨床應用價值的檢測指標。

測定β₂-MG的方法有酶聯免疫吸附分析法(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)、免疫透射比濁法、免疫散射比濁法、微粒子酶免疫分析法。酶聯免疫吸附分析法重復性差，適合大批量檢測。放射免疫分析法和放射比濁法由于核素有半衰期，試劑有效期短；此外核素有放射污染，而且核素實驗室的建設須經防疫部門的監督，操作人員亦須經過特殊訓練，不易普及，在測定時還需要昂貴的免疫測定儀；免疫透射比濁法特異性高，方法簡單、快速，無放射污染，結果穩定性、重復性滿足臨床要求。但在抗原、抗體比例不同時，如出現前帶或后帶現象，對測定結果有較大的影響。此外，在高血脂存在的情況下，脂蛋白的小顆?？尚纬蓾岫龋箿y定值假性升高，因此測定時盡量不用脂血標本。

發明內容

本發明采用膠體金法，該法快速、簡便，易操作，自動化程度高，且與ELISA法、免疫比濁法等均具有很好的相關性，臨床應用非常廣泛，與其他方法檢測試劑比較，通用性較強，而這其中首要解決的技術問題是提供一組能有效的、特異性結合人β₂-MG的抗體。更具體地說：

本發明的第一目的在于提供兩種抗人β₂-MG抗體。

第一種抗人β₂-MG抗體(BM12)，

其重鏈可變區含有以下的互補決定區：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：1所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：2所示的HCDR2和如序列SEQ ID NO：3所示的HCDR3；

以及其輕鏈可變區序列含有以下的互補決定區：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：4所示的 LCDR1、如序列SEQ ID NO：5所示的LCDR2和如序列SEQ ID NO：6所示的LCDR3。

優選的是本發明中BM12抗體重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。