[發明專利]人肺炎支原體表面蛋白單克隆抗體及應用

在審

• 申請號: 201811596147.6
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN110540971A
• 公開（公告）日: 2019-12-06
• 發明（設計）人: 胡征
• 申請（專利權）人: 湖北諾美華抗體藥物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C12N15/06;C07K16/12;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 42001 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 余曉雪;王敏鋒<國際申請>=<國際公布>

本發明提供了人肺炎支原體表面蛋白單克隆抗體及人肺炎支原體免疫層析檢測試紙條。用重組的肺炎支原體P1蛋白免疫Balb/c小鼠，得到一株分泌人肺炎支原體表面蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株Mp?13#，保藏編號CCTCC NO：C2017210；利用該細胞株分泌的單抗制備膠體金免疫層析試紙條，以雜交瘤細胞株Mp?13#分泌的單抗作為標記單抗，以抗P1蛋白多克隆抗體作為包被抗體，獲得的試紙條具有檢測速度快，特異性高，靈敏度高，穩定性強，制作簡便等特點。結果清晰易于判斷，能高效輔助肺炎支原體感染的臨床診斷。

技術領域

本發明屬于免疫學領域，涉及一種人肺炎支原體表面蛋白單克隆抗體、雜交瘤細胞株及應用。

背景技術

肺炎支原體(M.Pneumonia，Mp)是人類支原體肺炎的病原體。支原體肺炎的病理改變以間質性肺炎為主，有時并發支氣管肺炎，稱為原發性非典型性肺炎。主要經飛沫傳染，潛伏期2～3周，發病率以青少年最高。其一年四季均可發生，但多在秋冬時節。支原體肺炎的臨床表現和胸部X線檢查并不具特征性，單憑臨床表現和胸部X線檢查無法做出診斷。若要明確診斷，需要進行病原體的檢測。

目前檢測呼吸道中肺炎支原體的方法主要以傳統方法為主，即分離鑒定法，該方法所需時間長，一般要2-3天，很難滿足快速鑒定的需要；近幾年發展起來的PCR技術，是一種快速、靈敏、特異性好的技術，但是目前該技術還是依賴于傳統方法的前增菌步驟，而增菌液中往往還有PCR抑制劑，從而影響擴增的效果。同時，該技術還需要專業的檢測設備，不適合進行床旁檢測。以抗體為基礎的免疫學檢測已成為人體病原微生物檢測不可或缺的重要技術手段。目前已發展了多種特異性免疫檢測技術，如放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、熒光免疫分析(FIA)、化學發光免疫分析(CIA)、免疫沉淀反應、免疫凝集反應、ELISA檢測試劑盒、免疫膠體金試紙條、免疫乳膠檢測試劑等。其中ELISA檢測試劑盒、免疫膠體金試紙條等多種以抗體為基礎的免疫學檢測技術，以其簡便、快速、靈敏、準確、實用的特點已成為病原微生物檢測不可或缺的重要手段。因而，研究開發具有自主知識產權的病原微生物的抗體，是開發擁有自主知識產權的ELISA檢測方法、膠體金檢測方法等的基礎。

抗原成分的選擇是檢測特異性的關鍵。研究表明，由一種尖端樣結構的特殊細胞吸附器黏附于人體細胞是Mp感染的第一步，這種特殊的細胞吸附器是由多種黏附蛋白組成的，包括P1，P30，P116，HMVI-3等，其中序列保守性最高的P1與P30是主要黏附因子。Layh-Schmitt等發現缺失P1或P30蛋白的肺炎支原體將失去黏附上皮細胞的能力而成為無毒株，因此，選擇P1或P30蛋白作為特異性高的新的抗原成分進行研究是目前的熱點。Pl黏附蛋白是良好的免疫原，可誘發機體產生免疫應答，對P1基因進行序列分析研究發現，其中含有較多的終止密碼子UGA，因此對肺炎支原體的P1全長進行表達是根難實現的，片段表達是解決問題的關鍵。綜上，P1以其良好的保守性與表面可及性使其成為抗原檢測的良好標的物。利用生物信息學及免疫信息學軟件對P1基因序列分析，去除與其它細菌相似性高的基因序列，使其與其它細菌抗原的交叉性降低，將進一步保證P1蛋白的特異性，從而可利用其制備高特異性單克隆抗體。本研究選用具有種間特異性的表面蛋白P1作為抗原，制備特異性良好的單克隆抗體，并將其應用于制備肺炎支原體免疫層析檢測試紙條。

發明內容

為了解決背景技術中存在的上述技術問題，本發明提供了一種特異性強、敏感度高以及結果清晰易于判斷的人肺炎支原體表面蛋白單克隆抗體及應用。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種產生人肺炎支原體表面蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其特征在于：所述產生人肺炎支原體表面蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株是由中國典型培養物保藏中心(CCTCC)保藏的保藏號是保藏編號CCTCC NO：C2017210的雜交瘤細胞株Mp-13#。

一種產生人肺炎支原體表面蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株的制備方法，其特征在于：所述制備方法包括以下步驟：