[發明專利]一種血清脂蛋白（a）膠乳增強比濁檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201811594334.0
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN111239422A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 華權高;沈鶴霄;徐春雷
• 申請（專利權）人: 武漢生之源生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/92
• 分類號: G01N33/92;G01N33/543;G01N33/544;G01N21/82
• 代理公司: 武漢藍寶石專利代理事務所(特殊普通合伙) 42242
• 代理人: 嚴超

本發明公開一種利用脂蛋白（a）抗體、通過膠乳增強免疫比濁法測定血清中脂蛋白（a）的液體雙試劑試劑盒。本發明提供的試劑盒包括試劑R1、試劑R2和脂蛋白（a）標準品，其中，試劑R1包含高分子加速劑、防腐劑、表面活性劑、無機鹽及緩沖液；試劑R2包含結合抗人脂蛋白（a）抗體的聚苯乙烯膠乳顆粒，膠乳顆粒直徑為120?160nm，還包含防腐劑、表面活性劑、無機鹽及緩沖液；脂蛋白（a）標準品包含防腐劑、純化人脂蛋白（a）、無機鹽及緩沖液。本發明的試劑盒特異性強、靈敏度高、線性范圍寬、操作簡便，適用于各種全自動生化分析儀。

技術領域

本發明涉及免疫檢測領域，具體涉及一種血清脂蛋白(a)膠乳增強比濁檢測試劑盒及使用方法。

背景技術

人血清中的檢測方法原理是人血清中LP(a)與其相應的單克隆抗體結合，立即形成抗原—抗體復合物，產生濁度，該濁度的高低在一定量的抗體存在時與抗原的含量成正比。由于脂蛋白(a)為大分子脂蛋白，由脂質和蛋白質兩部分組成；其中脂質部分由膽固醇、磷脂等組成，位于顆粒的核心；蛋白質部分是由apo(a)和apoB100通過二硫鍵相連而成，位于顆粒的外周；每個LP(a)中apo(a)和apoB100呈1:1關系，也可能1～2個apo(a) 與1～2個apoB100結合，此外還存在游離的apo(a)。apo(a)富含糖蛋白，因此LP(a)也是一結構復雜的糖蛋白。apo(a)含有Kringle結構，其中的 Kringle 4-2(K4-2)的重復數目不同(3～40個)，每Kringle-4的相對分子量約12.7kDa，從而主導了apo(a)呈顯著的大小多態性(相對分子量從18.7kDa～66.2kDa)。apo(a)的大小多態性又決定了LP(a)顆粒大小多態性。由于Apo(a)分子大小極度不一,使顆粒大小不同的Lp(a)產生不一致的光散射與光吸收,給利用單抗測定Lp(a)帶來一定的困難。

目前臨床實驗室常用的免疫比濁法(ITA、INA)所用的單抗或多抗主要作用于K4-2，對apo(a)分子大小敏感的方法產生較大的偏差。作用于 K4-2位點的抗體反應性取決于apo(a)分子大小即K4-2重復的數目，如標本脂蛋白(a)的K4-2重復數目小于測定校準物脂蛋白(a)的K4-2重復數目，測定脂蛋白(a)的結果低估；相反標本脂蛋白(a)的K4-2重復數目大于測定校準物脂蛋白(a)的K4-2重復數目，測定結果高估。綜上所述，apo(a) 分子大小的不均一性不同程度地影響著LP(a)的免疫化學測定。apo(a)結構的特征對免疫測定提出嚴峻的挑戰。LP(a)的含量測定仍是以整個顆粒的質量表其結果，更使apo(a)的大小多態性對現時LP(a)測定的影響不可避免。為此，LP(a)測定的標準化程序尚須進一步研究解決。脂血是目前免疫比濁檢測法中最嚴重的干擾因素,本發明的反應體系中加強了表面活性劑的作用和采用自動扣除空白,使抗原抗體特異性反應之前,非特異性反應已達到平衡,故可在一定范圍內糾正溶血、高膽紅素或脂血對測定結果的影響。

發明內容

本發明的目的是為了解決上述問題而提供。

本發明通過以下技術方案實現：

本發明提供利用抗脂蛋白(a)駱駝科單域抗體、通過膠乳增強免疫比濁法測定血清中脂蛋白(a)的液體雙試劑試劑盒，該試劑盒包括試劑 R1、試劑R2和已知濃度的脂蛋白(a)抗原校準品，其中，所述試劑R1 包含高分子加速劑、防腐劑、表面活性劑、無機鹽及緩沖液；所述試劑R2 包含結合抗人脂蛋白(a)抗體的聚苯乙烯膠乳顆粒，膠乳顆粒直徑為 120-160nm，還包含防腐劑、表面活性劑、無機鹽及緩沖液；所述已知濃度的脂蛋白(a)抗原標準品包含防腐劑、純化人脂蛋白(a)、無機鹽及緩沖液，偶聯到膠乳上的抗體是駱駝科單域抗脂蛋白(a)抗體。