[發明專利]一種利用淀粉通過共培養生產平菇-裂壺藻復合物的方法

有效

• 申請號: 201811593850.1
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN109370926B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 岳才軍;王艷紅;馮仕軒
• 申請（專利權）人: 黑龍江八一農墾大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/36;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱東方專利事務所 23118
• 代理人: 曹愛華

1.一種利用淀粉通過共培養生產平菇-裂壺藻復合物的方法，其特征在于包括如下步驟：

一、用含有水溶性淀粉的培養基培養平菇菌絲：將平菇斜面菌種接于液體培養基中，振蕩培養12天后，按體積比10%的接種量，同樣條件下擴繁一次；然后再按體積比10%的接種量置于含質量/體積2-4%的水溶性淀粉、質量/體積0.6%的谷氨酸鈉、質量/體積0.3%的酵母粉、質量/體積0.15%的KH₂PO₄和質量/體積2%海水晶的pH為6.0液體培養基中，在22-28℃、150-200rpm振蕩條件下進行誘導馴化培養，10-15天后，得到平菇菌絲，作為種子細胞使用；

二、培養裂壺藻種子細胞：將裂壺藻斜面藻種接于種子活化液體培養基中，在振蕩條件下進行培養1-2天后，再按體積比10%的接種量，同樣條件下擴繁一次，得到裂壺藻種子細胞；

三、將平菇菌絲與裂壺藻種子細胞在搖瓶中共培養：先接種平菇菌絲于液體共培養基中，共培養基含有質量/體積2-4%的水溶性淀粉、質量/體積0.6%的谷氨酸鈉、質量/體積0.3%的酵母粉、質量/體積0.1%的KH₂PO₄和海水晶，共培養基的pH為6.0，接種量為平菇菌絲鮮重占共培養基體積的2-4%，平菇菌絲選擇細小的，每250ml搖瓶裝90ml培養基，在22-28℃、180rpm振蕩培養5天后，再將裂壺藻種子細胞接種于所述共培養基中，裂壺藻種子細胞按體積比5%-10%接種，繼續培養4-6天，得到平菇-裂壺藻復合物，取樣測定平菇-裂壺藻復合物油脂含量和生物量。

2.一種利用淀粉通過共培養生產平菇-裂壺藻復合物的方法，其特征在于包括如下步驟：

一、用含有水溶性淀粉的培養基培養平菇菌絲：將平菇斜面菌種接于液體培養基中，振蕩培養12天后，按體積比10%的接種量，同樣條件下擴繁一次；然后再按體積比10%的接種量置于含質量/體積2-4%的水溶性淀粉、質量/體積0.6%的谷氨酸鈉、質量/體積0.3%的酵母粉、質量/體積0.15%的KH₂PO₄和質量/體積2%海水晶的pH為6.0液體培養基中，在22-28℃、150-200rpm振蕩條件下進行誘導馴化培養，10-15天后，得到平菇菌絲，作為種子細胞使用；

二、培養裂壺藻種子細胞：將裂壺藻斜面藻種接于種子活化液體培養基中，在振蕩條件下進行培養1-2天后，再按體積比10%的接種量，同樣條件下擴繁一次，得到裂壺藻種子細胞；

三、將平菇菌絲與裂壺藻種子細胞在5升通用生物反應器中共培養：先接種平菇菌絲于共培養基中，共培養基含有質量/體積2-4%的水溶性淀粉、質量/體積0.6%的谷氨酸鈉、質量/體積0.3%的酵母粉、質量/體積0.1%的KH₂PO₄和海水晶，共培養基的pH為6.0，接種量為平菇菌絲鮮重占共培養基體積的2-4%，平菇菌絲選擇細小的，在通風比為0.6-0.8，攪拌轉數為200-350rpm條件下培養5天后，再將裂壺藻種子細胞接種于所述共培養基中，按體積比5%-10%接種，在通風比為0.6-0.8，攪拌轉數為200-350rpm條件下繼續培養4-6天，得到平菇-裂壺藻復合物，取樣測定平菇-裂壺藻復合物油脂含量和生物量。

3.根據權利要求1或2所述的利用淀粉通過共培養生產平菇-裂壺藻復合物的方法，其特征在于：所述的用含有水溶性淀粉的培養基培養平菇菌絲的具體方法為：將平菇斜面菌種接于含質量/體積2%的蔗糖、質量/體積0.3%的酵母粉、質量/體積0.15%的KH₂PO₄和質量/體積0.1%的MgSO₄的液體培養基中，液體培養基pH為 6.0，每250ml搖瓶裝90ml培養基，在25℃、150rpm的振蕩條件下，振蕩培養12天后，再按體積比10%的接種量，同樣條件下擴繁一次；然后再按體積比10%的接種量置于含質量/體積2-4%的水溶性淀粉、質量/體積0.6%的谷氨酸鈉、質量/體積0.3%的酵母粉、質量/體積0.15%的KH₂PO₄和質量/體積2%的海水晶的液體培養基中，pH為6.0，在25℃、150rpm振蕩條件下進行誘導馴化培養，10-15天后，得到平菇菌絲，作為種子細胞使用，使用前將平菇菌絲培養液用真空過濾去除培養基。

4.根據權利要求3所述的利用淀粉通過共培養生產平菇-裂壺藻復合物的方法，其特征在于：所述的培養裂壺藻種子細胞的具體方法：將裂壺藻斜面藻種接于含質量/體積2.5%的葡萄糖、質量/體積0.6%的谷氨酸鈉、質量/體積0.3%的酵母粉、質量/體積0.15%的KH₂PO₄和質量/體積2%的海水晶的液體培養基中，pH為6.0，每250ml搖瓶裝90ml培養基，在25℃、180rpm振蕩條件下進行活化培養；1-2天后，再按體積比10%的接種量擴繁一次，得到裂壺藻種子細胞。