[發明專利]一種口蹄疫病毒競爭ELISA檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201811592912.7
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN109709330B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 張濤;徐娜;劉月;何召慶;劉金萍;張曉慧;徐婉英;張春輝;孫聰
• 申請（專利權）人: 內蒙古必威安泰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

本發明涉及一種口蹄疫病毒抗體的競爭ELISA檢測試劑盒，該試劑盒包括：單域抗體sdAb?A；A/AKT?Ⅲ株FMDV滅活抗原；單克隆抗體9C10，封閉液；金標二抗；和支持介質。通過將口蹄疫抗原與包被在支持介質上的特異性單域抗體結合，單克隆抗體9C10和待檢血清中的抗體與抗原競爭性結合，通過金標的馬抗小鼠IgG檢測，在檢測樣品時只需要加入待檢樣品與單抗9C10孵育1h，即可加入金標二抗進行10min的顯色，洗滌后即可度值，操作簡單、診斷快速。本發明的競爭ELISA檢測試劑盒檢測靈敏度高，與病毒中和反應的符合率較其他商業檢測試劑盒更高。

技術領域

本發明屬于免疫測定法和相應的生物物質領域，具體涉及一種口蹄疫病毒抗體的檢測方法及應用。

背景技術

口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouthdisease virus，FMDV)引起的一種感染偶蹄目動物的急性、熱性、接觸傳染性動物疫病。FMD是國際獸醫局規定的必報傳染病，也被中國認定為一類傳染病。口蹄疫致死率很低，但病毒可以在體內長期存活，患畜持續排毒，成為重要的傳染源，會給畜牧業生產和進出口貿易造成巨大的經濟損失，該病不僅嚴重影響畜牧業的發展，也對人類健康構成很大威脅。因此，開發研究更便捷、快速、敏感、快速診斷試劑盒變得尤為重要。

發明內容

本發明的目的是提供一種口蹄疫病毒抗體的競爭ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：單域抗體sdAb-A，所述單域抗體sdAb-A序列如SEQ ID NO.1所示；A/AKT-Ⅲ株FMDV滅活抗原；單克隆抗體9C10，所述單克隆抗體9C10由分泌口蹄疫A型單克隆抗體雜交瘤細胞9C10株分泌，所述雜交瘤細胞9C10株保藏編號為CGMCC No.17081；封閉液；金標二抗；支持介質。

本發明通過特定的單域抗體sdAb-A和單克隆抗體9C10使得檢測的靈敏度高，與病毒中和反應的符合率較其他商業檢測試劑盒更高。

本發明以口蹄疫的A型單域抗體作為包被抗體，建立一種檢測口蹄疫病毒抗體的競爭ELISA檢測試劑盒。由于二抗一般為多抗，因此一個一抗分子上可以結合多個二抗分子，同時一個二抗分子上可以標記多個金顆粒，所有當待檢抗體為多抗時，信號經過放大，最終提高了檢測的靈敏度。另外由于二抗制備比較容易，所有無需將一抗進行標記，大大縮減了工作量。為該病檢驗檢疫提供有效實用的檢測方法。

A/AKT-Ⅲ株FMDV株可商業上獲得，例如可自新疆維吾爾自治區畜牧科學院獸醫研究所商購。

作為本發明的一種實施方式，本發明的試劑盒中，A/AKT-Ⅲ株FMDV抗原包被濃度為1.5ug/ml，所述單域抗體sdAb-A濃度為1.5ug/ml。

作為本發明的一種實施方式，本發明的試劑盒中，所述封閉液為5％脫脂乳。

作為本發明的一種實施方式，本發明的試劑盒中，所述單克隆抗體濃度為0.375ug/ml。

作為本發明的一種實施方式，本發明的試劑盒中，所述金標二抗為金標馬抗鼠多抗，金標抗體抗體濃度為0.025ug/ml。

作為本發明的一種實施方式，本發明的試劑盒中，所述支持介質為酶標板。

本發明還提供了所述口蹄疫病毒抗體的競爭ELISA檢測試劑盒在非診斷目的的檢測A型口蹄疫中的應用。

口蹄疫病毒抗體競爭ELISA檢測，具有快速、簡便、準確、穩定等特點，可用于口蹄疫的快速、批量抗體檢測。

本發明還提供了所述口蹄疫病毒抗體的競爭ELISA檢測試劑盒的檢測方法，通過將口蹄疫A/AKT-Ⅲ株FMDV滅活抗原與包被在支持介質上的單域抗體sdAb-A結合，單克隆抗體9C10和待檢血清中的抗體與抗原競爭性結合，通過金標的馬抗小鼠IgG進行檢測。