[發明專利]香樟胚性愈傷組織抗寒性評價方法

在審

• 申請號: 201811580279.X
• 申請日: 2018-12-24
• 公開（公告）號: CN109839304A
• 公開（公告）日: 2019-06-04
• 發明（設計）人: 杜麗;周嬋;王建格;劉譯朗;王圣;韓貝貝
• 申請（專利權）人: 南陽師范學院
• 主分類號: G01N1/42
• 分類號: G01N1/42
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 呂玉博

本發明提供香樟胚性愈傷組織抗寒性評價方法，將香樟胚性愈傷組織進行低溫脅迫處理，測定香樟胚性愈傷組織中脯氨酸、可溶性糖、丙二醛MDA含量以及超氧化物歧化酶SOD、過氧化氫酶CAT和過氧化物酶POD的活力；當脯氨酸、可溶性糖含量相對較高，SOD、CAT和POD活力相對較強，MDA含量相對較低時，則對應的香樟胚性愈傷組織的抗寒性相對較強；反之，則相對較弱。本發明不僅證實了胚性愈傷組織可以作為鑒定香樟抗寒性的良好材料，而且揭示了香樟胚性愈傷組織在低溫脅迫下表達模式以及各生理生化指標變化規律，并篩選獲得該材料響應低溫脅迫最劇烈的時刻和較敏感的生理指標。

技術領域

本發明涉及一種香樟胚性愈傷組織抗寒性評價方法。

背景技術

香樟(Cinnamomum camphora)作為亞熱帶地區重要的材用和特種經濟樹種，不僅發揮著重要的園林綠化價值，且其材質上乘，是貴重家具、造船和雕刻等的重要用材，此外，樟樹皮、果和根等具有一定的藥用價值。本申請人前期從香樟中分離得到4個CcCBF基因，命名為CcCBFa、CcCBFb、CcCBFc和CcCBFd(GenBank登錄號分別為KJ958932、KJ958933、KP336741和KP336742，以下簡稱CcCBFs基因)。欲在香樟中研究CcCBFs基因功能，然而，由于木本植物本身的特殊性，使其遺傳轉化和再生周期較長，通過獲得轉基因香樟植株研究CcCBFs基因功能不切實際。因此，發掘快速準確基因功能研究材料，具有重要意義。

胚性愈傷組織分裂活性強，且具備胚胎發生能力，研究發現以香樟胚性愈傷組織作為受體，能獲得較理想的轉化效果，香樟胚性愈傷組織可能是抗寒基因功能驗證的好材料。然而，目前尚不清楚香樟胚性愈傷組織能否準確快速的響應低溫脅迫。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明提供了香樟胚性愈傷組織抗寒性評價方法。本發明通過熒光定量PCR技術，分析香樟胚性愈傷組織在分子水平上感知低溫脅迫的能力，篩選獲得胚性愈傷組織相對表達量反應最劇烈的時刻；并通過測定滲透調節物質、膜代謝產物以及酶活性等指標，分析其在植物組織水平響應低溫脅迫的能力，篩選獲得胚性愈傷組織應對低溫較敏感的生理指標及對應的時刻，從而建立香樟胚性愈傷組織抗寒性鑒定體系。

本發明提供香樟胚性愈傷組織抗寒性評價方法，將香樟胚性愈傷組織進行低溫脅迫處理，測定香樟胚性愈傷組織中脯氨酸、可溶性糖、丙二醛MDA含量以及超氧化物歧化酶SOD、過氧化氫酶CAT和過氧化物酶POD的活力；當脯氨酸、可溶性糖含量相對較高，SOD、CAT和POD活力相對較強，MDA含量相對較低時，則對應的香樟胚性愈傷組織的抗寒性相對較強；當脯氨酸、可溶性糖含量相對較低，SOD、CAT和POD活力相對較弱，MDA含量相對較高時，則對應的香樟胚性愈傷組織的抗寒性相對較弱。

作為優選，所述低溫脅迫處理是在4℃和/或-4℃下處理0.5-24h。

作為優選，所述處理時的光照強度為3000lx，光照時間16h·d^-1。

作為優選，所述將香樟胚性愈傷組織進行低溫脅迫處理，測定香樟胚性愈傷組織中脯氨酸、可溶性糖、丙二醛MDA含量以及超氧化物歧化酶SOD、過氧化氫酶CAT和過氧化物酶POD的活力的具體方法為：將香樟胚性愈傷組織在4℃下處理2h，測定可溶性糖含量；將香樟胚性愈傷組織在4℃下處理8h，測定脯氨酸含量和SOD活力；將香樟胚性組織在4℃下處理12h，測定丙二醛含量和CAT活力。

作為優選，所述將香樟胚性愈傷組織進行低溫脅迫處理，測定香樟胚性愈傷組織中脯氨酸、可溶性糖、丙二醛MDA含量以及超氧化物歧化酶SOD、過氧化氫酶CAT和過氧化物酶POD的活力的具體方法為：將香樟胚性愈傷組織在-4℃下處理2h，測定可溶性糖和丙二醛的含量以及POD活力；將香樟胚性愈傷組織在-4℃下處理8h，測定脯氨酸含量和CAT活力。