[發明專利]人Vγ9Vδ2T細胞擴增方法與培養基

有效

• 申請號: 201811580040.2
• 申請日: 2018-12-24
• 公開（公告）號: CN109337870B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發明（設計）人: 尹芝南;吳揚哲;徐艷
• 申請（專利權）人: 廣東暨德康民生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 王術蘭

1.一種人Vγ9Vδ2T細胞擴增方法，其特征在于，包括：

步驟1、從人體外周血中提取外周血單個核細胞；

步驟2、提供人Vγ9Vδ2T細胞刺激擴增培養基，采用所述人Vγ9Vδ2T細胞刺激擴增培養基對所述外周血單個核細胞進行重懸，得到細胞懸液；

所述人Vγ9Vδ2T細胞刺激擴增培養基包括人Vγ9Vδ2T細胞培養基以及添加于所述人Vγ9Vδ2T細胞培養基中的膦酸類化合物；所述人Vγ9Vδ2T細胞培養基包括基礎培養基以及添加于所述基礎培養基中的白介素-2、白介素-15以及維生素C；

所述步驟1與步驟2的順序可調；

步驟3、將所述細胞懸液接種到細胞培養容器中培養60-100小時；

步驟4、采用所述人Vγ9Vδ2T細胞培養基進行換液，后續培養過程均采用所述人Vγ9Vδ2T細胞培養基進行。

2.如權利要求1所述的人Vγ9Vδ2T細胞擴增方法，其特征在于，所述基礎培養基為RPMI-1640培養基；所述膦酸類化合物包括唑來膦酸、依替膦酸、伊班膦酸、帕米膦酸、阿侖膦酸、利塞膦酸、米羅磷酸中的一種或多種。

3.如權利要求1所述的人Vγ9Vδ2T細胞擴增方法，其特征在于，所述步驟2中，所述細胞懸液的細胞密度為3～4×10⁶個/ml。

4.如權利要求1所述的人Vγ9Vδ2T細胞擴增方法，其特征在于，所述步驟2中，所述人Vγ9Vδ2T細胞刺激擴增培養基中，膦酸類化合物的濃度為1-1000μM；

所述人Vγ9Vδ2T細胞刺激擴增培養基與所述人Vγ9Vδ2T細胞培養基中，白介素-2的濃度為1-1000ng/ml，白介素-15的濃度為1-1000ng/ml，維生素C的濃度為10μM-800mM。

5.如權利要求1所述的人Vγ9Vδ2T細胞擴增方法，其特征在于，所述細胞培養容器為24孔板、48孔板或96孔板；所述步驟3中，將所述細胞懸液接種到細胞培養容器中培養72小時；所述步驟4的后續培養過程中，每隔48-72小時對細胞進行換液。