[發明專利]基于還原方法標記發光指示物的繆勒氏管激素測定試劑盒

在審

• 申請號: 201811567199.0
• 申請日: 2018-12-19
• 公開（公告）號: CN109444437A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 趙存洋;夏良雨;葉小琴;李瑞凈;吉燕子
• 申請（專利權）人: 廣東菲鵬生物有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/68;G01N33/543;G01N33/533;G01N33/535;G01N33/544;G01N33/577
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 肖麗

本發明涉及抗原檢測領域，具體而言，涉及一種基于還原方法標記發光指示物的繆勒氏管激素測定試劑盒。該試劑盒包括固相支持物以及AMH捕獲探針；所述固相支持物上包被有AMH第一抗體；所述AMH捕獲探針為標記有化學發光類信號強度指示劑的AMH第二抗其中所述AMH第二抗體標記所述化學發光類信號強度指示劑的方法包括：使用還原劑切斷所述AMH第二抗體的二硫鍵暴露出巰基，再將所述化學發光類信號強度指示劑通過能夠連接巰基功能基團標記于所述AMH第二抗體上。使用該試劑盒檢測AMH，穩定性好、靈敏度高、線性范圍廣。

技術領域

本發明涉及抗原檢測領域，具體而言，涉及一種基于還原方法標記發光指示物的繆勒氏管激素測定試劑盒。

背景技術

抗繆勒管激素(Anti-mullerian hormone，AMH)是一種屬于轉化生長因子β(TGFβ)家族的二聚體糖蛋白。這一超級家族的所有成員都參與調節組織生長和分化。在分泌之前，激素經過糖基化和二聚化，生成大約140kDa前體的兩個相同的二硫鍵的70kDa亞基。每個單體都含有一個大型N末端前區和一個小得多的C末端成熟域。與其他TGFβ家族成員相反，AMH被認為需要N末端域增強C末端域的活性，以得到完整的生物活性。隨后一部分AMH在胞漿轉運過程中，在前區和成熟域之間的某個位點切開，生成具有生物活性的110kDa N-末端和25kDa C-末端同型二聚體，仍與非共價復合物有關聯。AMH II型受體(AMH RII)僅結合具有生物活性的AMH。

在男性中，AMH由睪丸的支持細胞分泌。在男性的胚胎發育中，睪丸支持細胞的AMH分泌負責繆勒管的衰退和男性生殖道的正常發育。支持細胞的AMH分泌在胚胎發生的過程中開始，并持續終生。AMH從睪丸中持續生成直至青春期，隨后緩慢減少至青春期后水平。在女性中，AMH在卵巢的卵泡發育中發揮重要作用。卵巢中的卵泡發育包括兩個不同的階段：起始招募階段，此時初始卵泡開始成熟，并循環招募，促進一系列小囊狀卵泡生長，隨后選出其中的優勢卵泡(排卵用)。FSH指導循環招募。粒層細胞中的AMH表達開始于初級卵泡，在腔前的粒層細胞中達到最高，且小竇狀卵泡直徑最大約為6mm。當卵泡生長開始依賴FSH，AMH表達消失且無法檢測出。這種表達形式的AMH能夠支持AMH在卵泡發育兩個不同階段的抑制作用。第一，AMH抑制卵泡從初始階段轉變為成熟階段，進而在調節初始卵泡池中的剩余卵泡數量中發揮重要作用。第二，AMH能夠抑制卵泡對FSH的靈敏度，因此在卵泡選擇過程中發揮作用。

AMH的血清水平在女性出生時幾乎檢測不出，在青春期后達到最高水平。之后隨著年齡增長逐步下降，在停經后無法檢測出血清AMH水平經表明在月經周期過程中相對穩定，較年輕女性中觀察到顯著波動。進一步證明AMH水平在周期內和周期間的波動變化低于基值FSH。血清AMH水平在使用復合避孕藥物時顯著降低。AMH檢測的臨床應用推薦用于多種指征的預示。血清AMH檢測在臨床上主要被用于評估卵巢儲備，以反映竇前卵泡的數量，即所謂的卵泡數目(AFC)，以及用來預示對控制性促排卵的反應。AMH的進一步臨床應用是診斷兒童的性發育疾病(DSD)和監控顆粒細胞瘤，以檢測殘留或復發性疾病。AMH被建議作為AFC的替代標記物，來診斷多囊性卵巢綜合征(PCOS)和預測停經時間。

AMH最早的商業化試劑盒是由Anshlabs公司研發的酶免試劑盒，并且該試劑盒是應用Anshlab公司AMH專利抗體研發的N端-配C端鼠單克隆抗體酶免試劑盒。針對中國市場，2013年由廣州康潤最早注冊了酶聯免疫法的AMH商業化試劑盒，2015年深圳亞輝龍同時注冊了酶聯免疫法、吖啶酯化學發光法的AMH商業化試劑盒，并且亞輝龍公司申請了關于化學發光的專利(專利號：CN201610512550.0)，2017年深圳邁瑞公司注冊了堿性磷酸酶方法學的化學發光AMH商業化試劑盒,并且深圳微點公司、南京諾維贊分別與2017年、2018年注冊了免疫熒光法、量子點免疫熒光法的AMH商業化試劑盒。針對進口試劑，羅氏診斷于2015年注冊了該項目的電化學方法的商業化試劑盒，貝克曼公司于2017年注冊了該項目堿性磷酸酶方法學的商業化試劑盒。