[發明專利]檢測口蹄疫A型武漢株抗原的酶聯免疫試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201811564230.5
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN109613238B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 董春娜;張蕾;李靜;肖進;王飛;齊鵬
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;G01N33/569;G01N33/531
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳;李巍

本發明公開了一種特異性定量檢測口蹄疫A型武漢株抗原的酶聯免疫試劑盒及其應用。該試劑盒包括可以與口蹄疫A型武漢株(A/WH/09株)的特異性結合的單克隆抗體5G11作為捕獲抗體制成的酶標板和酶標抗體。利用本發明試劑盒進行檢測與目前口蹄疫其他毒株均不發生交叉反應。本發明試劑盒敏感性高、特異性好、且操作便捷，能夠穩定地檢測口蹄疫A型武漢株抗原含量及特異性區分口蹄疫A型武漢株與其他毒株。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，更具體地，本發明涉及一種特異性定量檢測口蹄疫A型武漢株抗原的酶聯免疫檢測試劑盒，適用于口蹄疫A型武漢株抗原的特異、快速、準確檢測。

背景技術

口蹄疫(foot-and-mouthdisease，FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)感染引起的偶蹄動物共患的一種烈性傳染病。口蹄疫的致死率很低，但是感染率很高。發病的主要癥狀為：口腔粘膜、舌、唇、鼻鏡、蹄叉、乳頭等部位發生水皰，破潰形成爛斑，病畜蹄痛臥地、嚴重者蹄殼邊緣潰裂或脫殼。不同動物的癥狀稍有不同，妊娠母牛可能流產，而后導致繁殖力降低；豬則以破蹄為最主要癥狀；山羊和綿羊的癥狀通常比牛溫和。口蹄疫傳染性高，傳播迅速，感染豬、牛、羊等牲畜常導致幼畜死亡，成年動物生產能力急劇下降，嚴重危害畜牧業的發展和畜產品的生產供應。由于其在世界范圍內廣泛分布，能感染70多種家養和野生動物，且發病率極高(約為100％)，嚴重影響畜牧業生產和國際貿易，因而受到各國的高度重視，被世界動物衛生組織(Office International DesEpizooties,OIE)列為法定報告動物疫病。

口蹄疫病毒(FMDV)是小RNA病毒科(picornavi-ridae)，口蹄疫病毒屬(aphthovirus)的成員，由一條長約8500個核苷酸的單股、正鏈RNA和衣殼蛋白組成。病毒衣殼由4種結構蛋白即VP1、VP2、VP3和VP4各60個拷貝組成，其中VP1和VP3是主要免疫性抗原。口蹄疫病毒(FMDV)具有多型性、易變性等特點，具有7個血清型，分別為A、O、C、SATI、SATII、SATIII及AsiaI型，各型之間無交叉保護反應。目前國內主要流行的是O型、A型和亞洲1型。

目前測定口蹄疫146S抗原的方法主要有蔗糖密度梯度離心，但該方法操作復雜，需要3天時間完成，耗時較長，且不能區分血清型，更無法對同一血清型不同毒株進行區分，因而，需要開發一種更為特異，靈敏、準確和可靠的檢測方法來對口蹄疫不同血清型和毒株進行區分。

目前，酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA)是市場上主流的免疫測定技術，已廣泛應用于臨床檢測，快速便捷且靈敏度高，且不需要特殊的儀器設備，可用于口蹄疫146S抗原檢測。目前市場上，用于檢測口蹄疫抗原的ELISA試劑盒大都采用多克隆抗體，比如中國農業科學院蘭州獸醫研究所開發的“一種A型口蹄疫146S抗原定量ELISA檢測方法及其試劑盒和應用”，該試劑盒專利(申請號CN201310017209.4)顯示采用了A型口蹄疫兔抗血清作為捕獲抗體，辣根過氧化物酶標記的豚鼠抗血清作為檢測抗體，能夠將A型與O型、亞洲1型進行區分，但無法區分A型的不同毒株，因此無法對多價疫苗中的每種毒株的口蹄疫146S抗原進行單獨定量檢測，其主要原因就是在于多克隆抗體針對多種抗原表位，而不同血清型尤其是同一血清型的不同毒株間的同源性非常高，可超過85％，可能僅有少數幾十個甚至幾個氨基酸序列的差異，可能存在相同的抗原表位，因此依據多克隆抗體建立的雙抗體夾心ELISA抗原檢測試劑盒不能對同一血清型不同毒株的口蹄疫病毒進行區分并定量檢測。單克隆抗體是針對抗原上單一表位篩選制備的抗體，能夠同源性識別不同毒株的口蹄疫病毒，是建立區分同一血清型不同毒株的口蹄疫146S抗原定量ELISA試劑盒的基礎。

發明內容