[發(fā)明專利]檢測口蹄疫A型武漢株抗原的酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811564230.5
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN109613238B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 董春娜;張蕾;李靜;肖進(jìn);王飛;齊鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 中牧實業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;G01N33/569;G01N33/531
• 代理公司: 北京惟誠致遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳;李巍

1.一種特異性定量檢測口蹄疫A型武漢株抗原的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括可以與口蹄疫A型武漢株146S抗原特異性結(jié)合的單克隆抗體作為捕獲抗體制成的酶聯(lián)反應(yīng)板和酶標(biāo)抗體；所述酶標(biāo)抗體為用可以與口蹄疫A型武漢株146S抗原特異性結(jié)合的單克隆抗體作為檢測抗體制成的酶標(biāo)抗體；

所述捕獲抗體含有重鏈可變區(qū)5G11-V_H和輕鏈可變區(qū)5G11-V_L；所述5G11-V_H和5G11-V_L均由決定簇互補(bǔ)區(qū)和框架區(qū)組成；

所述5G11-V_H和所述5G11-V_L的決定簇互補(bǔ)區(qū)均由CDR1、CDR2和CDR3組成；

所述5G11-V_H的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第25~34位氨基酸所示；

所述5G11-V_H的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第51~58位氨基酸所示；

所述5G11-V_H的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第98~114位氨基酸所示；

所述5G11-V_L的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第24~35位氨基酸所示；

所述5G11-V_L的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第49~58位氨基酸所示；

所述5G11-V_L的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第95~98位氨基酸所示；

所述檢測抗體含有重鏈可變區(qū)1C10-V_H和輕鏈可變區(qū)1C10-V_L，所述1C10-V_H和1C10-V_L均由決定簇互補(bǔ)區(qū)和框架區(qū)組成；

所述1C10-V_H和所述1C10-V_L的決定簇互補(bǔ)區(qū)均由CDR1、CDR2和CDR3組成；

所述1C10-V_H的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.3的第26~36位氨基酸所示；

所述1C10-V_H的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.3的第54~61位氨基酸所示；

所述1C10-V_H的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.3的第98~111位氨基酸所示；

所述1C10-V_L的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第24~36位氨基酸所示；

所述1C10-V_L的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第50~59位氨基酸所示；

所述1C10-V_L的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第94~99位氨基酸所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中還包括抗原標(biāo)準(zhǔn)品，所述抗原標(biāo)準(zhǔn)品為口蹄疫A型武漢株A/WH/09株146S抗原。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：5G11-V_H的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1的第1~128位所示；其5G11-V_L的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2的第1~115位所示；

所述1C10-V_H的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.3的第1~127位所示；其1C10-V_L的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.4的第1~116位所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述酶聯(lián)反應(yīng)板的獲得方法是將捕獲抗體溶于100μl的 pH 9.6的碳酸鹽溶液，然后加到96孔聚苯乙烯酶聯(lián)反應(yīng)板，每孔100ng~1000ng特異性單克隆抗體，2~8℃下放置8~12小時，使捕獲抗體與酶聯(lián)反應(yīng)板充分結(jié)合，然后按照300μl/孔加入含有10mg/ml牛血清白蛋白pH7.4的PBS緩沖液，37℃封閉處理2~3小時，甩干后，待酶聯(lián)反應(yīng)板干燥后4℃密封保存。