[發(fā)明專利]一種L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中氨基酸雜質(zhì)的薄層色譜檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811559100.2
• 申請(qǐng)日: 2018-12-19
• 公開（公告）號(hào): CN109358152B
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳程俊;李緒全;劉紅;方佳茂;陳偉濱;林曉群;張松浩;陳榕興
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東盛泰華生物制藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/90
• 分類號(hào): G01N30/90
• 代理公司: 重慶博凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50212
• 代理人: 張先蕓

本發(fā)明涉及一種L?2?氨基?5?胍基戊酸原料中氨基酸雜質(zhì)的薄層色譜檢測(cè)方法，包括溶液的制備、薄層層析檢測(cè)，以及結(jié)果的判定；其中，薄層層析檢測(cè)包括氨基酸雜質(zhì)的薄層層析檢測(cè)；薄層色譜檢測(cè)采用硅膠G薄層板，展開劑為丙醇和濃氨溶液的混合溶液；展開環(huán)境為溫度為26～40℃，相對(duì)濕度為75%～90%。本發(fā)明具有分離度好、靈敏度高、檢測(cè)時(shí)間短、檢測(cè)成本低、操作簡(jiǎn)單、設(shè)備簡(jiǎn)單、顯色容易、結(jié)果直觀可靠等優(yōu)點(diǎn)，適合工業(yè)上用于L?2?氨基?5?胍基戊酸原料中其他氨基酸雜質(zhì)的檢測(cè)及質(zhì)量控制，為合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供依據(jù)，以便更好控制和掌握產(chǎn)品質(zhì)量，確保臨床用藥的安全性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品和藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中氨基酸雜質(zhì)的薄層色譜檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

L-2-氨基-5-胍基戊酸（CAS登錄號(hào)為74-79-3）屬于氨基酸類化合物，具有重要的生理功能，常作為營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，也是氨基酸膠囊和輸液的重要成分。L-2-氨基-5-胍基戊酸可有效提高免疫力、促進(jìn)免疫系統(tǒng)分泌內(nèi)生性物質(zhì)，有利于對(duì)抗癌細(xì)胞及預(yù)防病毒感染；有利于嚴(yán)重外傷、燒傷等需要大量組織修護(hù)患者的康護(hù)。臨床上，L-2-氨基-5-胍基戊酸適用于血氨增高的肝昏迷，特別是伴有堿中毒的患者；用于輔助測(cè)定腦垂體功能；用于精液分泌不足和精子缺乏引起的男性不育癥；用于嬰幼兒補(bǔ)充L-2-氨基-5-胍基戊酸缺乏。

目前，L-2-氨基-5-胍基戊酸主要采用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)，其代謝過程中會(huì)產(chǎn)生大量氨基酸類同系物，并且發(fā)酵原料也包含多種氨基酸組分，這成為L(zhǎng)-2-氨基-5-胍基戊酸原料其他氨基酸雜質(zhì)的主要來源。微生物發(fā)酵生產(chǎn)L-2-氨基-5-胍基戊酸的主要氨基酸類同系物雜質(zhì)，主要包括L-2,5-二氨基戊酸、L-2,5-二氨基戊酸、（S）-2-氨基-5-脲基戊酸、L-2-氨基戊二酸、（S）-2-乙酰氨基-5-氨基戊酸、L-2-氨基丁二酸等，由于大都與L-2-氨基-5-胍基戊酸性質(zhì)極其相近，徹底分離純化清除較為困難，易于殘留于L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中，影響產(chǎn)品質(zhì)量?，F(xiàn)行版各國(guó)藥典收載的L-2-氨基-5-胍基戊酸均設(shè)有其他氨基酸檢查項(xiàng)，中國(guó)藥典規(guī)定不超過0.4%，歐洲藥典規(guī)定不超過0.5%，美國(guó)藥典規(guī)定不超過2.0%，而日本藥典規(guī)定不超過0.2%。

薄層色譜（Thin Layer Chromatography，TLC），是一種層析分離技術(shù)。具有操作方便、設(shè)備簡(jiǎn)單、顯色容易、結(jié)果直觀、展開速率快、兼具分離和鑒定雙重功能，以及節(jié)省時(shí)間、成本低、檢測(cè)手段多、信息來源廣等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于藥物的雜質(zhì)控制?，F(xiàn)行中國(guó)、美國(guó)、日本等國(guó)家藥典收載的L-2-氨基-5-胍基戊酸的其他氨基酸檢查均采用TLC法，選用L-2,6-二氨基己酸作為系統(tǒng)適用性評(píng)價(jià)的參照物，以評(píng)價(jià)L-2-氨基-5-胍基戊酸與其他氨基酸雜質(zhì)的分離效果。然而，微生物發(fā)酵法生產(chǎn)的L-2-氨基-5-胍基戊酸原料，其中同系物L(fēng)-2,5-二氨基戊酸與L-2-氨基-5-胍基戊酸的性質(zhì)最相近，采用各國(guó)藥典的TLC法均難以實(shí)現(xiàn)有效分離，并且藥典TLC法的靈敏度較低，難以檢出低于0.2%的L-2-氨基丁二酸同系物，因此，非常有必要開發(fā)分離效果更好、靈敏度更高的L-2-氨基-5-胍基戊酸原料其他氨基酸雜質(zhì)的TLC檢測(cè)方法，以提高L-2-氨基-5-胍基戊酸原料的產(chǎn)品質(zhì)量，滿足其他氨基酸雜質(zhì)限度不超過0.2%的更高要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中其他氨基酸雜質(zhì)的薄層色譜分析檢測(cè)方法，解決現(xiàn)有TLC法存在L-2-氨基-5-胍基戊酸與其它氨基酸雜質(zhì)的分離效果差和靈敏度較低的問題，通過建立和實(shí)施該檢測(cè)方法，為L(zhǎng)-2-氨基-5-胍基戊酸原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供依據(jù)，以便更好控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保食用和藥用安全。

本發(fā)明所述技術(shù)問題是由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。

一種L-2-氨基-5-胍基戊酸原料其他氨基酸雜質(zhì)的薄層色譜檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：溶液的制備、薄層層析檢測(cè)、以及結(jié)果的判定；