[發明專利]一種L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中氨基酸雜質的薄層色譜檢測方法有效
| 申請號： | 201811559100.2 | 申請日： | 2018-12-19 |
| 公開（公告）號： | CN109358152B | 公開（公告）日： | 2020-11-24 |
| 發明（設計）人： | 陳程俊;李緒全;劉紅;方佳茂;陳偉濱;林曉群;張松浩;陳榕興 | 申請（專利權）人： | 廣東盛泰華生物制藥有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/90 | 分類號： | G01N30/90 |
| 代理公司： | 重慶博凱知識產權代理有限公司 50212 | 代理人： | 張先蕓 |
| 地址： | 515326 廣東省揭陽市普寧市云落鎮云*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 氨基 戊酸 原料 氨基酸 雜質 薄層 色譜 檢測 方法 | ||
1.一種L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中氨基酸雜質的薄層色譜檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）供試品溶液的制備：稱取L-2-氨基-5-胍基戊酸原料適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中含20mg和40mg的溶液，分別作為第一供試品溶液和第二供試品溶液；
2）稀釋液的制備：用氫氧化鈉溶液調節pH值至10.0～12.0的水溶液，作為稀釋液；
3）對照品貯備液的制備：精密稱取L-2-氨基丁二酸對照品，加稀釋液溶解并稀釋配制成濃度為0.8mg/mL的溶液，作為L-2-氨基丁二酸對照品貯備液；
4）對照品溶液的制備：精密量取第一供試品溶液1ml，置于50ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml和對照品貯備液1ml，置于同一10ml量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；
5）系統適應性溶液的制備：分別稱取L-2-氨基-5-胍基戊酸、L-2,5-二氨基戊酸、（
6）L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中氨基酸雜質的測定：取步驟1）、4）和5）制備的第一供試品溶液、第二供試品溶液、對照品溶液和系統適用性溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以異丙醇和濃氨溶液體積比為6～8：3作為展開劑，置溫度為26～40℃和相對濕度為75%～90%環境中，展開約10cm后，晾干，在80℃干燥約30分鐘，放冷，噴以1%茚三酮的正丁醇溶液，在80℃加熱10分鐘，立即檢視。
2.根據權利要求1所述L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中氨基酸雜質的薄層色譜檢測方法，其特征在于，所述展開環境的溫度28～35℃，相對濕度為75%～85%。
3.根據權利要求1所述L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中氨基酸雜質的薄層色譜檢測方法，其特征在于，
所述步驟6）中，將薄層板置于層析缸中，于26～40℃、75%～90%相對濕度環境中展開約10cm，取出晾干；
結果判定為：
①系統適用性試驗：如果對照品溶液的薄層色譜圖中顯示兩個清晰的斑點，系統適用性溶液的薄層色譜圖中顯示六個完全分離的清晰斑點，則系統適用性試驗符合要求；否則系統適用性試驗不符合要求；
②樣品檢測：如果供試品溶液顯示雜質斑點不超過1個，并且其顏色不深于對照品溶液中L-2-氨基-5-胍基戊酸的斑點，則L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中的氨基酸雜質含量低于千分之二；如果供試品溶液顯示雜質斑點超過1個，則視為L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中的氨基酸雜質含量高于千分之二；如果供試品溶液只顯示1個雜質斑點，但其顏色深于對照品溶液中L-2-氨基-5-胍基戊酸的斑點，則L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中的氨基酸雜質含量高于千分之二。
4.根據權利要求1所述L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中氨基酸雜質的薄層色譜檢測方法，其特征在于，具體步驟包括：
1）供試品溶液的制備：稱取L-2-氨基-5-胍基戊酸原料適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中含20mg和40mg的溶液，分別作為第一供試品溶液和第二供試品溶液；
2）稀釋液的制備：用氫氧化鈉溶液調節pH值至10.0～12.0的水溶液，作為稀釋液；
3）對照品貯備液的制備：精密稱取L-2-氨基丁二酸對照品，加稀釋液溶解并稀釋配制成濃度為0.8mg/mL的溶液，作為L-2-氨基丁二酸對照品貯備液；
4）對照品溶液的制備：精密量取第一供試品溶液1ml，置于50ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml和對照品貯備液1ml，置于同一10ml量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；
5）系統適應性溶液的制備：分別稱取L-2-氨基-5-胍基戊酸、L-2,5-二氨基戊酸、（
6）L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中氨基酸雜質的測定：取步驟1）、4）和5）制備的第一供試品溶液、第二供試品溶液、對照品溶液和系統適用性溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以異丙醇和濃氨溶液體積比為7：3作為展開劑，置溫度為32～35℃和相對濕度為80%～85%環境中，展開約10cm后，晾干，在80℃干燥約30分鐘，放冷，噴以1%茚三酮的正丁醇溶液，在80℃加熱10分鐘，立即檢視；
7）結果判定：
①系統適用性試驗：如果對照品溶液的薄層色譜圖中顯示兩個清晰的斑點，系統適用性溶液的薄層色譜圖中顯示六個完全分離的清晰斑點，則系統適用性試驗符合要求；否則系統適用性試驗不符合要求；
②樣品檢測：如果第一供試品溶液顯示雜質斑點不超過1個，其顏色不深于對照品溶液中L-2-氨基-5-胍基戊酸的斑點，并且第二供試品溶液顯示的L-2-氨基丁二酸斑點顏色不深于對照品溶液中L-2-氨基丁二酸的斑點，則L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中的氨基酸雜質含量低于千分之二；如果第一供試品溶液顯示雜質斑點超過1個，則視為L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中的氨基酸雜質含量高于千分之二；如果第一供試品溶液只顯示1個雜質斑點，但其顏色深于對照品溶液中L-2-氨基-5-胍基戊酸的斑點，則L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中的氨基酸雜質含量高于千分之二。
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