[發明專利]丙型肝炎病毒重組抗原及其應用

在審

• 申請號: 201811558638.1
• 申請日: 2018-12-19
• 公開（公告）號: CN109705197A
• 公開（公告）日: 2019-05-03
• 發明（設計）人: 葉小琴;夏良雨;趙存洋;陳艷華;潘少麗
• 申請（專利權）人: 廣東菲鵬生物有限公司
• 主分類號: C07K14/18
• 分類號: C07K14/18;G01N33/576;G01N33/543
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 逯恒

本發明涉及分子生物學技術領域，具體而言，涉及一種丙型肝炎病毒重組抗原及其應用。該重組抗原，其序列中包含core、NS3、NS4A、NS4B的蛋白區段。該重組抗原各區優勢表位抗原連接，靈敏度高，穩定性好。本發明還改良了包被抗原和與標記物相偶模式，不引入其他蛋白，同時保證抗原活性和試劑盒靈敏度的情況下，優化試劑盒特異性。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，具體而言，涉及一種丙型肝炎病毒重組抗原及其應用。

背景技術

丙型肝炎病毒(Hepatitis Virus C，HCV)是一類球形的單股正鏈RNA病毒，長度約為9600個核苷酸。基因組序列具有高度變異性。根據不同區域的基因序列變異情況，丙型肝炎病毒分為6個基因型和80多種基因亞型。目前研究顯示，丙型肝炎病毒的ORF可編碼至少11個蛋白，包括3個結構蛋白：核心蛋白(core)、E1和E2；7個非結構蛋白：NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B，以及小蛋白P7。

丙型肝炎病毒感染后，約80％的人并不會出現任何癥狀；急性癥狀包括發熱、全身乏力、食欲下降、惡心、嘔吐、腹痛、尿色深、大便顏色變淺、關節酸痛和黃疸；約75-85％的新感染者出現慢性肝病，慢性感染者中60-70％會出現慢性肝病，5-20％會出現肝硬化，1-5％會死于肝硬化或肝癌。

丙型肝炎病毒雖然在感染者體內滴度較低，但其幾乎所有結構和非結構蛋白都能夠誘發機體的免疫應答，并產生相應的抗體。抗丙型肝炎病毒抗體是人體免疫細胞對丙型肝炎病毒感染做出免疫反應而產生的抗體。抗HCV抗體檢測具有簡便、快捷、易于開展的特點，是目前公認的HCV感染篩查首選檢測方法。

發明內容

本發明提供了一種丙型肝炎病毒重組抗原，并對其可能的應用進行了闡述。該重組抗原各區優勢表位抗原連接，靈敏度高，穩定性好。

具體的，本發明涉及一種丙型肝炎病毒重組抗原，其序列中包含core、NS3、NS4A、NS4B的蛋白區段。

本發明提供了一種丙型肝炎病毒重組抗原，并對其可能的應用進行了闡述該重組抗原各區優勢表位抗原連接，靈敏度高，穩定性好。

根據本發明的一方面，本發明還涉及如上所述的重組抗原在制備丙型肝炎檢測劑中的應用。

根據本發明的一方面，本發明還涉及一種丙型肝炎檢測試劑盒，其含有包被丙型肝炎第一抗原Ag₁的固相載體以及標記有標記物的丙型肝炎第二抗原Ag₂；其中Ag₁與Ag₂中的至少一種為如上所述的重組抗原。

具體實施方式

本發明同時提供一種改良的雙抗原夾心法丙型肝炎試劑盒制備方法，該方法所用抗原為丙型肝炎病毒抗原各區優勢表位抗原連接并重復串聯表達而成或者化學技術自相偶聯而成的嵌合抗原，靈敏度高，穩定性好；本發明還改良了包被抗原和與標記物相偶模式，不引入其他蛋白，同時保證抗原活性和試劑盒靈敏度的情況下，優化試劑盒特異性。即先將抗原采用基因工程技術同片段重復串聯表達或化學交聯方法使其按一定比例自身交聯，形成重復表位，增加表位暴露幾率；表面修飾磁珠和處理堿性磷酸酶，偶聯抗原時避開與抗原巰基和氨基連接的反應模式，減少抗原表位覆蓋的概率。

具體的，本發明涉及以下技術方案：

本發明涉及一種丙型肝炎病毒重組抗原，其序列中包含core、NS3、NS4A、NS4B的蛋白區段。

在一些實施方式中，所述core、NS3、NS4A、NS4B的蛋白區段中的一種或多種重復表達≥2次。

在一些實施方式中，所述重組抗原以core-NS3-NS4A-NS4B的順序串聯。

在一些實施方式中，所述重組抗原以(core-NS3-NS4A-NS4B)×2的順序串聯。