[發(fā)明專利]一種質(zhì)粒以及噬菌體輔助的連續(xù)定向進(jìn)化系統(tǒng)和定向進(jìn)化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811557458.1
• 申請(qǐng)日: 2018-12-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109943581B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-02-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉陳立;李小明;崔金明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳先進(jìn)技術(shù)研究院
• 主分類號(hào): C12N15/63
• 分類號(hào): C12N15/63;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 深圳市科進(jìn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44316
• 代理人: 吳乃壯

1.一種質(zhì)粒，其特征在于，包括AP1質(zhì)粒和AP2質(zhì)粒；

AP1質(zhì)粒攜帶gIII基因，并且該質(zhì)粒的啟動(dòng)子與核糖體結(jié)合位點(diǎn)之間設(shè)置有功能蛋白識(shí)別位點(diǎn)；

AP2質(zhì)粒攜帶功能蛋白基因；

所述啟動(dòng)子為J23109啟動(dòng)子；

所述AP1中的功能蛋白識(shí)別位點(diǎn)被所述AP2質(zhì)粒的功能蛋白基因編碼的功能蛋白識(shí)別，起阻遏效應(yīng)；所述AP1質(zhì)粒的基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述AP2質(zhì)粒的基因序列如SEQID NO.2所示。

2.含有權(quán)利要求1所述的AP1質(zhì)粒和AP2質(zhì)粒的噬菌體輔助的連續(xù)定向進(jìn)化系統(tǒng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的噬菌體輔助的連續(xù)定向進(jìn)化系統(tǒng)，其特征在于，所述連續(xù)定向進(jìn)化系統(tǒng)還包括目的基因替換gIII基因的噬菌體、宿主菌、誘變質(zhì)粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的噬菌體輔助的連續(xù)定向進(jìn)化系統(tǒng)，其特征在于，權(quán)利要求1所述的AP1質(zhì)粒和AP2質(zhì)粒以轉(zhuǎn)入宿主菌的形式存在。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的噬菌體輔助的連續(xù)定向進(jìn)化系統(tǒng)，其特征在于，所述目的基因包括膜蛋白的基因；

所述膜蛋白包括轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、受體蛋白、離子通道蛋白。

6.根據(jù)權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的噬菌體輔助的連續(xù)定向進(jìn)化系統(tǒng)，其特征在于，所述宿主菌為攜帶F因子的大腸桿菌；所述宿主菌為E.coli S1030。

7.采用權(quán)利要求3-6任一項(xiàng)所述的噬菌體輔助的連續(xù)定向進(jìn)化系統(tǒng)進(jìn)行的定向進(jìn)化方法，其特征在于，將AP1質(zhì)粒、AP2質(zhì)粒和誘變質(zhì)粒轉(zhuǎn)入所述宿主菌中，得到進(jìn)化宿主菌；

所述進(jìn)化宿主菌與所述目的基因替換gIII基因的噬菌體在篩選壓力逐步變大的情況下進(jìn)行多輪培養(yǎng)篩選，得到突變體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的定向進(jìn)化方法，其特征在于，所述目的基因?yàn)槿樘寝D(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，所述篩選壓力通過(guò)控制胞外底物纖維二糖的濃度進(jìn)行，所述篩選壓力逐步變大為：胞外底物纖維二糖濃度從29mM逐步降至29μM。