[發明專利]一種488nm激發的免洗SNAP-tag探針及其制備方法

有效

• 申請號: 201811550856.0
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN111333618B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 徐兆超;喬慶龍
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C07D401/14
• 分類號: C07D401/14;C07D401/06;C07D473/18;C07D519/00;C09K11/06;G01N21/64;A61K49/00
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 張晨

1.一種488nm激發的免洗SNAP-tag探針，其特征在于該探針的結構如下：

其中，R₁為中的一種；

R₂為H、C1-4烷基；

R₃為H、C1-4烷基。

2.如權利要求1所述的一種488nm激發的免洗SNAP-tag探針的合成方法，其特征在于包含步驟如下：

(1)中間體N-(4-羥甲基)芐基-4-溴-5-硝基-1,8-萘酰亞胺的合成：

將4-溴-5-硝基-1,8-萘酐和4-氨甲基芐醇溶于無水乙醇中；將反應液加熱至40-90℃，攪拌1-10h；將反應液冷卻至室溫后，減壓除去溶劑后，硅膠柱分離，以體積比為800-100:1的二氯甲烷和甲醇為洗脫劑，減壓除去溶劑得米白色固體N-(4-羥甲基)芐基-4-溴-5-硝基-1,8-萘酰亞胺；

(2)中間體N-(4-羥甲基)芐基-4,5-二脂肪胺基-1,8-萘酰亞胺的合成：

將N-(4-羥甲基)芐基-4-溴-5-硝基-1,8-萘酰亞胺溶于乙二醇甲醚中，并向其中加入脂肪環胺；將反應液緩慢升溫至100-140℃，并在氮氣保護下反應10-24h；減壓除去溶劑，硅膠柱分離，以體積比為400-30:1的二氯甲烷和甲醇為洗脫劑，除去溶劑，得棕黃色固體N-(4-羥甲基)芐基-4,5-二脂肪胺基-1,8-萘酰亞胺；

(3)SNAP-tag探針的合成

將N-(4-羥甲基)芐基-4,5-二脂肪胺基-1,8-萘酰亞胺、叔丁醇鉀和2-氨基-6-(N-甲基)四氫吡咯基鳥嘌呤置于史萊克瓶中，氮氣置換2-5次后加入干燥的N,N-二甲基甲酰胺；室溫反應3-10h后，加壓除去溶劑，硅膠柱分離，以體積比為100-10:1的二氯甲烷和甲醇為洗脫劑，除去溶劑得免洗SNAP-tag探針。

3.根據權利要求2所述的一種488nm激發的免洗SNAP-tag探針的合成方法，其特征在于步驟(1)中：4-溴-5-硝基-1,8-萘酐：4-氨甲基芐醇的質量比為1:0.5-2；4-溴-5-硝基-1,8-萘酐的質量與無水乙醇的體積比為1:20-80g/mL。

4.根據權利要求2所述的一種488nm激發的免洗SNAP-tag探針的合成方法，其特征在于步驟(2)中：N-(4-羥甲基)芐基-4-溴-5-硝基-1,8-萘酰亞胺與脂肪環胺的質量比為1:1-3；N-(4-羥甲基)芐基-4-溴-5-硝基-1,8-萘酰亞胺的質量與乙二醇甲醚的體積比為1:50-200g/mL；

脂肪環胺為氮丙啶、氮雜環丁烷、四氫吡咯。

5.根據權利要求2所述的一種488nm激發的免洗SNAP-tag探針的合成方法，其特征在于步驟(3)中：N-(4-羥甲基)芐基-4,5-二脂肪胺基-1,8-萘酰亞胺、叔丁醇鉀、2-氨基-6-(N-甲基)四氫吡咯基鳥嘌呤的質量比為1:1-5:1-5；N-(4-羥甲基)芐基-4,5-二脂肪胺基-1,8-萘酰亞胺的質量與N,N-二甲基甲酰胺的體積比為1:80-200g/mL。

6.如權利要求1所述的一種488nm激發的免洗SNAP-tag探針在識別與檢測SNAP-tag蛋白中的應用。

7.如權利要求1所述的一種488nm激發的免洗SNAP-tag探針在超分辨成像中的應用。

8.如權利要求1所述的一種488nm激發的免洗SNAP-tag探針在細胞、組織及活體內對目標蛋白的熒光成像的應用。