[發明專利]非破壞性從單頭薊馬類昆蟲標本中高效提取DNA的方法

在審

• 申請號: 201811546925.0
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN109371016A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 魯雯敏;王軍;席景會
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司 22201
• 代理人: 邵銘康;朱世林

1.一種非破壞性從單頭薊馬類昆蟲標本中高效提取DNA的方法，其特征在于，包括下列步驟：

1.1取樣：將單頭薊馬類昆蟲從75％的酒精溶液中取出，在干凈濾紙上放置30s，用鑷子將標本轉移至載玻片上，再將載玻片放置在解剖鏡的視野中央；

1.2扎孔：將單頭薊馬類昆蟲的腹部朝上，用無菌的00號昆蟲針對薊馬的腹部刺穿4～6下，其中第I腹節除外；

1.3消化：將扎孔的單頭薊馬類昆蟲放入裝有250～350ul消化液和20～25ul蛋白酶K的1.5ml離心管，再將離心管放入金水浴上孵育3～4小時；

1.4標本回收：孵育結束后，吸取保留的蟲體表皮至50％～75％酒精溶液新的1.5ml離心管中，進行后續的玻片制作；

1.5DNA沉淀和吸附：在孵育好的消化液中加氯仿：異戊醇為240:10～336:14，渦旋混勻：30S，室溫離心：10000g,5min，離心后吸取上清至新的1.5ml無菌離心管中,加入同等體積的Buffer CBL，無水乙醇，渦旋，孵育：60℃，10min進行DNA微型吸附柱過柱環節，室溫離心，棄濾液，將DNA微型吸附柱安裝到收集管上；

1.6漂洗：將Buffer HB：450～500ul加至過濾柱，室溫離心，丟棄濾液，再重復2次加入DNA Wash Buffer:600～700ul，室溫離心：10000g,1min，棄掉濾液，再將DNA吸附柱安裝到收集管上，室溫空管離心：10000g,2min；

1.7吹干：丟掉收集管，將DNA吸附柱安裝到新的無菌1.5ml離心管上，在超凈工作臺內高檔風吹干:15min；

1.8洗脫：向吹干的吸附柱中加入30ul Elution Buffer,室溫放置:2min，離心:1min，洗脫DNA重復二次，將DNA在-20℃保存。