[發明專利]一種蝦脊蘭植株再生體系建立的方法

在審

• 申請號: 201811545104.5
• 申請日: 2018-12-17
• 公開（公告）號: CN109588312A
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發明（設計）人: 高晗;高本旺;王毅敏
• 申請（專利權）人: 三峽植物園管理處（宜昌市林業科學研究所;宜昌市國有金銀崗試驗林場管理處）
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 宜昌市慧宜專利商標代理事務所(特殊普通合伙) 42226
• 代理人: 彭婭

本發明提供一種蝦脊蘭植株再生體系建立的方法，屬于植物組織培養技術領域。其中包含以蝦脊蘭未成熟種胚作為外植體，依次經過種子滅菌、原球莖誘導、生根誘導得到完整蝦脊蘭植株的過程。所述種子滅菌溶液為75%酒精和0.1%升汞溶液；所述植株再生體系培養基為MS培養基上添加了NAA。本發明方法可使蝦脊蘭屬植物再生，對后期蝦脊蘭種質資源擴繁及保存極其重要，可為蝦脊蘭屬植物及蘭科植物種子萌發難題的解決提供研究材料和參考，為園林及藥用等植物資源開發及保護生物學研究提供基礎資料。

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域，涉及一種蝦脊蘭植株再生體系的建立方法。

背景技術

蝦脊蘭屬Calanthe R.Br.植物隸屬蘭科(Orchidaceae)，為多年生地生草本植物，全球約150種，我國有49種和5變種，主產于長江流域及以南地區。蝦脊蘭屬植物形態多樣、花色豐富、花型奇特，具有極高的觀賞價值，有“蘭中西施”的美譽。蝦脊蘭屬植物同時具有較好的藥用價值，以全草、根、假鱗莖或根莖入藥，具有清熱解毒、潤肺止咳、活血散結和止痛消腫等功效，可用于瘰疬、淋巴結核、跌打損傷、腰肋疼痛、扁桃體炎、肌腱拉傷、脫肛和痔瘡等的治療。此外有報道稱，同屬內某些蝦脊蘭乙酸乙酯提取物對多種腫瘤細胞株具有顯著細胞毒作用，相關酶水解產物具有抗白血病作用，同時，在蝦脊蘭屬植物中還發現吲哚苷以及具有生理活性的生物堿，這些生物堿的存在使蝦脊蘭在傳統中藥中有抗炎、抗菌、抗毒素等作用。

蘭科植物是生物多樣性保護的旗艦類群之一，蝦脊蘭屬作為蘭科植物的一種，在中國物種紅色名錄第一卷將其全部物種列為珍稀瀕危物種。2017年中國高等植物受威脅名錄中，受威脅物種，共3879種，其中28種蝦脊蘭屬植物在列。蝦脊蘭種子本身存在發芽抑制物質、遺傳因素、休眠、向胚供給水和氧氣受種皮機械阻力等因素，使其萌發困難。通過植物組織培養，促進蝦脊蘭植物種子萌發并形成完整植株，對后期蝦脊蘭種質資源擴繁及保存極其重要，可為蝦脊蘭屬植物種子萌發難題的解決提供參考，同時為其在園林及藥用等資源開發及保護生物學研究提供基礎資料。

發明內容

本發明提供一種蝦脊蘭植株再生體系建立的方法，通過植物組織培養的方法完成。

本發明技術方案：

一種蝦脊蘭植株再生體系建立的方法，包括以下步驟：

1)種子的選擇：野外采集未成熟蝦脊蘭蒴果；

2)種子的滅菌：將步驟1)所采集莢果進行表面清洗及滅菌消毒，經滅菌后，獲得的種莢內部的種子作為外植體；

3)原球莖誘導：將步驟2)得到的外植體均勻撒播至種子誘導萌發培養基中進行培養，得到蝦脊蘭原球莖；

4)誘導植株生根：將步驟3)得到的蝦脊蘭原球莖接到誘導生根培養基中培養得到蝦脊蘭完整植株；

完成蝦脊蘭植株再生體系的建立。

優選地，所述步驟1)所選蝦脊蘭未成熟莢果為健康完整，未被蚊蟲蛀咬破壞的蒴果。

優選地，所述步驟2)滅菌方法為依次經過流水沖洗、70％-80％酒精、0.1％-0.2％氯化汞溶液滅菌。

優選地，所述步驟3)培養溫度25±2℃，光照強度900-1100lx，光照時間12-14h/d，培養時間為120d。

優選地，所述步驟3)種子誘導萌發培養基包括基礎培養基和其他添加物，所述基礎培養基為花寶1號或MS或1/2MS，所述中其他添加物為蛋白胨或6-BA或NAA 或TDZ或其組合，所述其他添加物在培養基的含量為0.001-3000mg/L。

進一步優選地，所述步驟3)種子誘導萌發培養基包括基礎培養基和其他添加物，所述基礎培養基為MS，所述其他添加物為NAA，NAA的加入量為0.02mg/L。