[發(fā)明專利]OBR基因及用作溆浦鵝肥肝脂肪沉積相關(guān)遺傳標記的方法

有效

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• 申請日: 2018-12-14
• 公開（公告）號: CN109797223B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曲湘勇;柳序;郭松長;賀長青
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所(普通合伙) 43008
• 代理人: 江巨鰲

本發(fā)明公開了一種OBR基因及作用溆浦鵝肝臟脂肪沉積相關(guān)遺傳標記的方法，利用瘦蛋白受體基因OBR及其作為溆浦鵝肥肝性狀的遺傳標記，通過測定溆浦鵝肥肝大小，并篩選溆浦鵝OBR基因多態(tài)性，然后將OBR基因多態(tài)性與肥肝性狀關(guān)聯(lián)分析，其OBR分子標記的序列如SEQ ID NO:1所示。在SEQ ID NO:1的573bp處存在一個G/A堿基突變，GG基因型溆浦鵝肝臟大小顯著高于GA基因型個體。本發(fā)明為溆浦鵝肥肝性狀的標記輔助選擇提供了分子標記。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于家禽分子生物技術(shù)及育種領(lǐng)域，主要是測定溆浦鵝肥肝性狀相關(guān)的遺傳標記，具體地說是，是測定OBR基因中的多態(tài)性，即與溆浦鵝肥肝性狀相關(guān)的瘦蛋白受體基因的單核苷酸多態(tài)性(Singlenucleotide polymorphism，縮寫為SNP)的存在。

技術(shù)背景

溆浦鵝是我國肥肝性能最優(yōu)，體型大，生長快，抗病性強，優(yōu)勢特別明顯的國家級地方品種遺傳資源，2014年進入國家級畜禽遺傳資源保護名錄。鵝肥肝是世界級高檔美味健康食品中三大珍品之一，其所富含的不飽和脂肪酸、亞油酸、卵磷脂等對軟化血管、降低血脂、預防心腦血管疾病的發(fā)生具有重要保健作用。由于溆浦鵝缺乏科學系統(tǒng)選育，導致填肥后肝臟大小個體差異大，嚴重制約了鵝產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)效率、產(chǎn)品品質(zhì)和經(jīng)濟效益。常規(guī)選育較慢，隨著生物分子技術(shù)的發(fā)展，使得我們能夠從DNA水平尋找與溆浦鵝肥肝性狀相關(guān)的主效基因或分子標記，并在育種中將其應用于標記輔助選擇，一提高選育進程，獲得更大的經(jīng)濟效應。

瘦蛋白受體(Leptin receptor,OBR)是一種跨膜蛋白，屬于I類細胞因子超家族受體，有5種異構(gòu)體，即OBRa、OBRb、OBRe、OBRd和OBRf。它們具有相同的胞外區(qū)，而胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域則具有長度和序列上的差異。OBR主要生理功能是與瘦素結(jié)合，使瘦素發(fā)揮調(diào)節(jié)體內(nèi)能量平衡、脂肪貯存等生理作用。有關(guān)家禽OBR基因的研究很少，Guy等首次克隆了雞OBR cDNA序列，與哺乳動物的同源性平均為60％。Dunn等將雞的OBR基因定位在8號染色體上。顧志良等在OBR基因外顯子9上檢測到了1個堿基突變，并推測等位基因A可能與沉積較多腹脂有關(guān)。王穎等在雞OBR基因內(nèi)含子8上檢測到了T—C、G—A 2個基因突變，產(chǎn)生的不同基因型在腹脂重和腹脂率上差異顯著，BB型個體腹脂重和腹脂率顯著高于AB型個體，極顯著高于AA型個體。初步推斷OBR基因可能是影響雞脂肪性狀的主效基因或與主效基因緊密連鎖

目前，關(guān)于OBR基因多態(tài)性與肥肝性能的關(guān)聯(lián)分析相對較少。溆浦鵝DNA遺傳標記、遺傳多樣性和相關(guān)功能基因的研究仍處于起步階段，關(guān)于溆浦鵝肥肝脂肪沉積相關(guān)的遺傳標記尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種OBR基因及其作為溆浦鵝肥肝性狀遺傳標記的用途；同時篩選與溆浦鵝肥肝性狀相關(guān)的SNP，以期應用于標記輔助選擇或標記輔助滲入，并提供上述遺傳標記在溆浦鵝標記輔助選擇中的應用。

本發(fā)明實施例是這樣實現(xiàn)的，一種OBR基因，所述基因為與表示溆浦鵝肥肝性狀相關(guān)的基因，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所述。序列表SEQ ID NO:1的573bp處有1個G/A的堿基突變，導致多態(tài)性存在。所用引物如下：

正向引物：5’—TTTGCCGTTAGTACCAGG—3’

反向引物：5’—GCACAGACAAACAGGAGC—3’

本發(fā)明實施例的另一目的在于提供一種用OBR基因作為溆浦鵝溆浦鵝肥肝性狀相關(guān)遺傳標記的方法，包括如下步驟：

(1)根據(jù)GenBank中鵝OBR基因的序列，用Primer 5.0設(shè)計引物，覆蓋該基因全部外顯子14到外顯子16序列；

(2)以溆浦鵝基因組DNA為模板，PCR擴增，產(chǎn)物純化，克隆，獲得如序列表SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列；