[發(fā)明專利]一種CD137基因修飾人源化動物模型的構(gòu)建方法及其應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811535784.2 | 申請日： | 2018-12-14 |
| 公開（公告）號： | CN109735498B | 公開（公告）日： | 2020-11-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 趙靜;琚存祥;馬秀英;張明坤;侯歡歡;高翔 | 申請（專利權(quán)）人： | 江蘇集萃藥康生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/85;C12N15/90;A01K67/027 |
| 代理公司： | 南京艾普利德知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32297 | 代理人： | 張鉑 |
| 地址： | 210032 江蘇省南京市浦口區(qū)*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 cd137 基因 修飾 人源化 動物 模型 構(gòu)建 方法 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種CD137基因修飾人源化動物細胞的構(gòu)建方法，其特征在于包括如下步驟：
（1）選擇小鼠CD137基因的完整胞外區(qū)兩端作為打靶位點，設(shè)計包含人源CD137基因胞外區(qū)的同源DNA供體和鑒定方案，所述小鼠CD137基因的胞外區(qū)序列如SEQ ID No:1所示，人源CD137基因的胞外區(qū)序列如SEQ ID No:2所示，所述同源DNA供體的序列如SEQ ID No:3所示；
（2）基于CRISPR/Cas9技術(shù)，制備Cas9或其表達載體，在小鼠CD137基因的完整胞外區(qū)的5’端和3’端各設(shè)計一條sgRNA或其表達載體；
或者，制備Cas9、sgRNA的共表達載體；
所述sgRNA的序列如SEQ ID No:4和7所示；
（3）將步驟（2）制備得到的Cas9、sgRNA，或者各自的表達載體或共表達載體注射入受精卵，敲除小鼠CD137基因的胞外區(qū)的同時將人源CD137基因的胞外區(qū)插入到基因組。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述小鼠為BALB/c或C57BL/6小鼠。
3.一種CD137基因修飾人源化動物模型的構(gòu)建方法，其特征在于采用權(quán)利要求1或2任一項所述的方法制備得到的CD137基因修飾人源化小鼠受精卵移植到代孕母體中，進行飼養(yǎng)，生產(chǎn)出的后代即為F0代小鼠，經(jīng)基因型鑒定正確的F0代小鼠性成熟后與同背景野生型小鼠配繁獲得F1代，即為CD137基因修飾人源化動物模型。
4.一種雙靶點基因修飾CD137人源化動物模型的構(gòu)建方法，其特征在于將非CD137的免疫檢查點基因修飾人源化小鼠與權(quán)利要求3所述方法構(gòu)建的CD137人源化小鼠交配，獲得其他基因雜合CD137雜合人源化小鼠，雙靶點雜合人源化小鼠與單靶點純合人源化小鼠以體外受精的快速擴繁方式獲得單靶點純合另外一個靶點雜合的人源化小鼠，以此小鼠為基礎(chǔ)，將其兄妹互配獲得雙靶點純合人源化小鼠。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述非CD137的免疫檢查點基因選自PD-1、PD-L1、OX40、CTLA4、TIGIT、GITR、BTLA、LAG3、TIM3、CD28、CD40、ICOS、CD47、SIRPa、VISTA。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于江蘇集萃藥康生物科技有限公司，未經(jīng)江蘇集萃藥康生物科技有限公司許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201811535784.2/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
