[發(fā)明專(zhuān)利]一種靶向人低分化胃癌細(xì)胞的核酸適配體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811530107.1
• 申請(qǐng)日: 2018-12-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109554370B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 方瑾;李婉明
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/115
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/115;G01N33/574;A61K49/00
• 代理公司: 沈陽(yáng)亞泰專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 21107
• 代理人: 史力伏

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種靶向人低分化胃癌細(xì)胞的核酸適配體及其應(yīng)用。所述核酸適配體序列為5’?ACACCAAAATCGTCCGTTTCGTTTTAGTCCGTCTCTTTAGGGTGT?3’。本發(fā)明所述的核酸適配體具有高特異性、高親和力，在4℃，25℃，37℃均能保持良好活性。本發(fā)明的核酸適配體可作為分子探針，對(duì)人低分化胃癌細(xì)胞進(jìn)行特異性成像和檢測(cè)。在低分化胃癌的預(yù)測(cè)和診治方面具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種靶向人低分化胃癌細(xì)胞的核酸適配體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

胃癌是常見(jiàn)高發(fā)的惡性腫瘤，也是全球癌癥死亡的第三大原因。根據(jù)腺體的分化程度，胃癌可分為分化型和未分化型。臨床研究顯示，中高分化胃癌，惡性程度較低，預(yù)后較好；而低分化胃癌，惡性程度較高，預(yù)后較差。此外，胃癌的分化狀態(tài)還與化療效果具有相關(guān)性。因此，準(zhǔn)確區(qū)分胃癌組織的分化狀態(tài)，對(duì)于判斷預(yù)后以及指導(dǎo)低分化胃癌的治療具有重要意義。但目前對(duì)胃癌組織分化狀態(tài)的判斷主要基于對(duì)病理切片的形態(tài)學(xué)觀察，缺少基于分子標(biāo)志物的高靈敏度、高特異性檢測(cè)探針及方法。

核酸適配體（aptamer）是采用指數(shù)富集的配基系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)（SystematicEvolution of Ligands by Exponential enrichment，SELEX）從大容量RNA/單鏈DNA隨機(jī)文庫(kù)中篩選得到的能與靶標(biāo)物質(zhì)特異性結(jié)合的寡核苷酸序列，被稱(chēng)為化學(xué)抗體。與傳統(tǒng)的抗體相比，具有特異性強(qiáng)，親和力高，穩(wěn)定性好，易于進(jìn)行化學(xué)修飾形成各種形式的分子探針等特點(diǎn)。消減Cell-SELEX是以完整細(xì)胞作為靶標(biāo)進(jìn)行核酸適配體篩選的技術(shù)，由于使用具有功能表型差異的靶細(xì)胞和非靶細(xì)胞進(jìn)行消減篩選，可獲得針對(duì)特定功能表型細(xì)胞的核酸適配體。由于篩選出的核酸適配體主要與細(xì)胞表面分子結(jié)合，特別適合用來(lái)制備分子探針進(jìn)行靶細(xì)胞靶向成像分析以及作為靶向載體等。有研究將高轉(zhuǎn)移細(xì)胞與低轉(zhuǎn)移細(xì)胞進(jìn)行消減篩選，得到能與轉(zhuǎn)移細(xì)胞特異性結(jié)合的核酸適配體；有研究將病毒感染細(xì)胞與非感染細(xì)胞進(jìn)行消減篩選，制備了可以特異性檢測(cè)病毒感染的核酸適配體分子探針。

但目前未見(jiàn)以低分化胃癌細(xì)胞為靶細(xì)胞，以中高分化胃癌細(xì)胞為非靶細(xì)胞，篩選人低分化胃癌細(xì)胞特異性核酸適配體的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明提供了一種以人低分化胃癌細(xì)胞BGC-823為靶細(xì)胞，以中分化胃癌細(xì)胞SGC-7901為非靶細(xì)胞，經(jīng)過(guò)消減Cell-SELEX技術(shù)篩選得到的能夠與人低分化胃癌細(xì)胞特異性結(jié)合的核酸適配體，可以制備成分子探針進(jìn)行人低分化胃癌細(xì)胞/組織的靶向成像等應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案。

一種靶向人低分化胃癌細(xì)胞的核酸適配體，所述核酸適配體序列如SEQ ID NO .1所示：5’-ACACCAAAATCGTCCGTTTCGTTTTAGTCCGTCTCTTTAGGGTGT-3’。

所述的核酸適配體在人低分化胃癌細(xì)胞特異性成像中的應(yīng)用。

所述腫瘤包括胃癌、低分化胃癌。

所述的核酸適配體在鑒定核酸適配體靶標(biāo)中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下。

1. 提供了一種新的能夠靶向人低分化胃癌細(xì)胞的核酸適配體序列。所述核酸適配體具有高親和力和高特異性：對(duì)靶細(xì)胞的解離常數(shù)Kd值為納摩爾級(jí)（35.2 ± 1.1 nM）；對(duì)靶細(xì)胞及其它低分化胃癌細(xì)胞結(jié)合能力強(qiáng)，對(duì)非靶細(xì)胞及其它中高分化胃癌細(xì)胞結(jié)合能力弱或不結(jié)合，對(duì)正常細(xì)胞不結(jié)合。

2. 由于對(duì)靶細(xì)胞的結(jié)合具有高親和力和高特異性，以及良好的溫度穩(wěn)定性，所述核酸適配體特別適合作為分子探針進(jìn)行組織的靶向成像。采用所述核酸適配體結(jié)合量子點(diǎn)構(gòu)建量子點(diǎn)探針進(jìn)行胃癌患者組織的成像分析，結(jié)果顯示了明顯的低分化組織特異性，熒光強(qiáng)度為低分化組織＞中高分化組織＞正常癌旁組織。

附圖說(shuō)明