[發明專利]一種ATP多位點結合熒光增強型探針分子及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811527279.3
• 申請日: 2018-12-13
• 公開（公告）號: CN109456349B
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 許澤軍;劉亞楠;張道洪;張俊珩;程娟
• 申請（專利權）人: 中南民族大學
• 主分類號: C07F5/02
• 分類號: C07F5/02;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 余曉雪

1.一種ATP熒光分子探針的制備方法，其特征在于，步驟如下：

(1)在反應容器中，將羅丹明衍生物加入到無水乙醇中攪拌至完全溶解，然后滴加多胺類化合物，在76-90℃下攪拌回流至少24h，溶液顏色變淡或至無色，反應結束，冷卻到室溫后旋蒸除去溶劑，然后加入水和二氯甲烷萃取洗滌，收集有機相，旋蒸除去溶劑，用體積比6:0.2～6:0.8的二氯甲烷和乙醇混合液過柱色譜分離提純，得到含氨基的羅丹明衍生物中間體Rh-NH₂；

所述的羅丹明衍生物為羅丹明B或羅丹明6G；

所述的多胺類化合物為乙二胺、二乙烯三胺或三乙烯四胺；

羅丹明衍生物和多胺基化合物的摩爾比為＝1：10-20；

(2)將步驟(1)得到的產物Rh-NH₂與含醛基的苯硼酸在無水乙醇中于76-90℃回流反應至少10h，冷卻到室溫后旋蒸除去溶劑，然后用乙醚洗滌沉淀、離心、干燥，得到含仲胺鏈段和苯硼酸修飾的羅丹明衍生物的ATP熒光探針；

步驟(2)中，Rh-NH₂、含醛基的苯硼酸和無水乙醇的用量比例為0.5mmol：0.5mmol：(8-16)mL；

所述的含醛基的苯硼酸化合物為鄰醛基苯硼酸或對醛基苯硼酸；

所述ATP熒光探針，其結構通式如下：

或

其中，n＝0或1或2，R₁＝B(OH)₂或H，R₂＝B(OH)₂或H，R₁和R₂不同。

2.權利要求1制備所得的ATP熒光分子探針在選擇性識別ATP中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述ATP熒光分子探針在選擇性識別ATP時，不受AMP、SDP、GTP、GMP、ADS、CTP、H₂PO₄^-、HPO₄^2-、Cl^-、PO₄^3-、NO₃^-、SO₄²和/或CO₃^2-的干擾。

4.權利要求1制備所得的ATP熒光分子探針在活細胞線粒體標記中的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于：所述活細胞為A375細胞。

6.權利要求1制備所得的ATP熒光分子探針在實時監測活細胞線粒體ATP濃度變化的熒光成像中的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：所述活細胞為A375細胞。