[發明專利]一種細菌總數的快速檢測方法

在審

• 申請號: 201811525024.3
• 申請日: 2018-12-13
• 公開（公告）號: CN109576339A
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 李抄;陳盟;杜耀華;程智;李玲君;呂蒙
• 申請（專利權）人: 軍事科學院系統工程研究院衛勤保障技術研究所
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供了一種細菌總數的快速檢測方法，屬于細菌總數檢測方法技術領域。本發明提供的快速檢測方法，包括以下步驟：待測樣本液和體細胞ATP釋放劑反應，再添加ATP發光試劑反應，再添加細菌ATP釋放劑反應；熒光檢測儀檢測所得反應液；將得到的熒光數據代入換算公式a中計算，得到待測樣本液中細菌數量。采用體細胞ATP釋放劑和ATP發光試劑分步添加消耗待測樣品中體細胞中ATP和游離ATP后，再在細菌ATP釋放劑作用下使細菌ATP釋放，實現僅檢測細菌ATP產生的熒光信號的目的。本檢測方法實現利用ATP檢測儀準確對細菌計數的目的，還具有檢測靈敏度高、檢測時間短的特點，應用范圍廣。

技術領域

本發明屬于細菌總數檢測方法技術領域，具體涉及一種細菌總數的快速檢測方法。

背景技術

細菌計數是應用范圍較廣的研究手段，例如水體中細菌的分布是檢測水體受污染程度的一個重要指標，而研究細菌的分布是檢測水體中受污染程度的一個重要指標，而研究細菌分布情況最重要的是對細菌數量的準確測定，這對環境評價以及實際工程應用具有重要意義。再例如，篩查尿路是否發生感染時需對尿液中細菌數量做檢測，由此可知，細菌計數在篩查尿路感染中具有臨床意義。因此，提供一種簡便快速的細胞總數的檢測方法具有重要意義。

目前，細菌計數的方法主要包括計數器計數法、比濁法、培養法等等。計數器計數法即用血細胞計數器進行計數。由于計數室的體積是一定的(0.1mm³)，可根據計數器刻度內的細菌數計算樣品中的含菌數。此方法屬于手工檢測，細菌濃度要求嚴格(一般細菌濃度在10⁴～10⁷個/ml)，需要專業人員完成，耗時長，最后分析結果可能會因為操作人員的改變而出現差距。培養法是日常生活、生產檢測以及實驗室檢測最常用的活菌計數法，包括平板培養法和涂布培養法，是根據每個活的細菌能生長出一個菌落的原理設計的。培養法成本低、操作簡單，培養結果以30～300個菌落為宜，因而待測菌液濃度要求嚴格，且培養周期長(一般需要24～48h)，操作環境要求嚴格。比濁法又稱濁度測定法，是根據液體的渾濁程度反推液體中懸浮物的濃度。細菌的生長使得培養液變渾濁，在一定波長范圍內，菌液的濃度和渾濁度成正比，用分光度計測定渾濁度，即可推算出細菌濃度。這種方法簡單、操作便捷，但只能檢測含有大量細菌的懸浮液，得出相對的細菌數目，精確度低，對顏色太深的樣品不能用此法測量。

目前，還有一種快速評價細菌污染程度的方法-ATP法。三磷酸腺苷(AdenosineTriphosphate，ATP)是一切生命體能量的直接來源，普遍存在于動植物細胞、微生物和食物殘留中。ATP熒光檢測法是根據螢火蟲發光原理開發的快速檢測技術。在有氧條件下，蟲熒光素酶可催化蟲熒光素和ATP之間發生氧化反應形成氧化熒光素并發出熒光，發出的熒光強度與ATP含量呈正比例關系。通過測試熒光信號的強度可得知待測目標被污染的程度，因此檢測ATP可作為判斷是否潔凈的直觀指標。

但是ATP法只能檢測到目標物被污染的程度，即細胞內、細胞外所有ATP的值，包括游離、動植物體細胞以及細菌細胞內的ATP。動植物體細胞中所含的ATP量是細菌ATP量的100～1000倍，而釋放生物細胞外的游離ATP同樣也會對細菌ATP檢測產生影響，因而如果要用ATP法檢測細菌數量的話，必須排除游離、動植物體細胞ATP對檢測的影響。當前的ATP法檢測儀無法區分當前發光值是由于生物細胞釋放到體外的游離ATP造成的，還是動植物、微生物細胞內ATP造成的，因而無法直接應用到細菌檢測中去。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種細菌總數的快速檢測方法，實現利用ATP檢測儀準確對細菌計數的目的。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種細菌總數的快速檢測方法，包括以下步驟：

1)待測樣本液和體細胞ATP釋放劑混合反應，得到除體細胞ATP溶液；