[發明專利]一種環狀RNA hsa_circKPNA2_002及其特異性擴增引物和應用

在審

• 申請號: 201811508139.1
• 申請日: 2018-12-11
• 公開（公告）號: CN109371022A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 王立斌;田進海;王丹妮
• 申請（專利權）人: 寧夏醫科大學總醫院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 逯長明;許偉群

本發明公開了一種環狀RNA hsa_circKPNA2_002及其特異性擴增引物和應用，其中，所述環狀RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其在結直腸癌組織中高表達，可以作為篩查結直腸癌的分子標志物；本發明還提供一種用于擴增所述環狀RNA的特異性擴增引物，所述特異性擴增引物包括上游引物和下游引物，其中，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；本發明還公開了所述特異性擴增引物在制備用于結直腸癌篩查的試劑盒中的應用及包括所述特異性擴增引物的試劑盒。

技術領域

本發明屬于腫瘤分子生物學領域，尤其涉及一種用于結直腸癌診斷的環狀RNA，用于所述環狀RNA的特異性擴增引物及應用。

背景技術

結直腸癌是發生在下消化道的惡性腫瘤，已經成為全球性的公共健康問題。隨著人民生活水平的提高，結直腸腫瘤的發病率近年來呈明顯升高的趨勢，其發病率和致死率均位居前列，嚴重影響人們的生活質量。早期診斷、早期治療能夠大大減少結直腸癌惡化的進一步發生，隨著分子水平的發展以及對結直腸癌發生、發展、治療相關機制的進一步研究，對靶向診斷和靶向治療分子標志物的篩選和研究成為結直腸癌研究最受關注的領域之一。

環狀RNA(Circular RNA，circRNA)是一類不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴、并以共價鍵形成環形結構的非編碼RNA分子，主要由前體RNA(pre-mRNA)通過可變剪切加工產生。circRNA大多數定位于細胞質中，少數定位于細胞核內，大多數由外顯子形成。circRNA不易被核酸外切酶降解，與線性RNA相比能更穩定地存在于生物體內，其在不同的物種中具有保守性，同時在不同組織及發育階段具有表達特異性，大多數circRNA在不同的物種間含量豐富且都具有組織特異性，在人體組織、唾液、血液和外泌體中都有穩定表達，這使得circRNA成為腫瘤患者診斷、治療和預后追蹤的理想生物標志物。

近年來，關于circRNA與腫瘤之間的關系研究已有很多報道，已經明確circRNA具有調節腫瘤細胞增殖、凋亡、血管形成、代謝以及耐藥等功能。Zhang等通過對不同泌乳時期的兩組老鼠的乳腺組織進行circRNA芯片檢測，發現circRNA在不同泌乳期老鼠乳腺組織中的表達有很大差異，兩個時期檢測到circRNA種類大多數不同。因此，circRNA可能是結直腸癌精準診療的新靶點，發現和篩選結直腸癌相關的circRNA標志物，對早期防治結直腸癌具有重要的意義和價值。

發明內容

本申請的目的在于提供以下幾個方面：

第一方面，本申請提供一種環狀RNA，所述環狀RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其中，起始兩個核苷酸與最末兩個核苷酸為成環結合位點。

所述環狀RNA在circ-RNA數據庫circBank中的全稱為hsa_circKPNA2_002，簡稱circKPNA2_002，在circBase數據庫中的編號為hsa_circ_0045475。

圖1為所述環狀RNA的基因結構圖，如圖1所示，所述環狀RNA hsa_circKPNA2_002的序列全長325bp，位于人類的17號染色體正義鏈上66033225-66036882之間，由KPNA2基因外顯子(exon)2-4區剪切環化而成，CDS表示該環狀RNA來自編碼區。F和R分別代表該基因特異性引物的位置，箭頭代表引物引發的方向。

根據本申請的第二方面，提供本發明第一方面所述環狀RNA hsa_circKPNA2_002作為篩查結直腸癌的分子標志物的用途。

本發明研究發現相對于結直腸癌患者癌旁正常組織，環狀RNA hsa_circKPNA2_002在結直腸癌組織中顯著上調。

因此，所述環狀RNA hsa_circKPNA2_002可用于結直腸癌篩查。