[發明專利]一種海水環境中硫酸鹽還原菌的快速檢測方法

有效

• 申請號: 201811492170.0
• 申請日: 2018-12-06
• 公開（公告）號: CN109520984B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 鄭來寶;張盾;戚鵬
• 申請（專利權）人: 南通中國科學院海洋研究所海洋科學與技術研究發展中心;中國科學院海洋研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C12Q1/04
• 代理公司: 蘇州華博知識產權代理有限公司 32232
• 代理人: 何蔚

本發明公開了一種海水中硫酸鹽還原菌的快速檢測方法，將待測樣品與選擇性培養基在厭氧條件下培養，培養結束后將培養液經濾膜過濾，然后加入到GSH?Au(I)?Pb(II)熒光檢測液中，待測樣品中的硫酸鹽還原菌代謝產生的硫離子可與熒光檢測液中的GSH?Au(I)?Pb(II)反應，使得熒光檢測液的熒光淬滅，通過熒光檢測液的熒光強度變化可得出待測樣品中硫酸鹽還原菌的濃度。本發明不使用生物酶，反應條件溫和，易保存。本發明方法選擇性高，檢測周期短，成本低，具有極大的推廣價值。

技術領域

本發明屬于分析化學領域，具體涉及一種海水中硫酸鹽還原菌的快速檢測方法。

背景技術

硫酸鹽還原菌(Sulfate-Reducing Bacteria，簡稱SRB)是一種腐蝕性微生物，其可通過自身的代謝過程將硫酸根離子或亞硫酸根離子還原為硫離子，產生的硫離子可促進鋼鐵的腐蝕，對海洋工程材料造成嚴重的損失和威脅。目前廣泛使用的硫酸鹽還原菌的檢測方法為最大可能數法。雖然最大可能數法具有檢測靈敏度高的特點，但其檢測周期過長(15天以上)。因此，開發一種靈敏度高、成本低的硫酸鹽還原菌的快速檢測方法顯得尤為重要。

發明內容

為解決以上技術問題，本發明提供一種海水環境中硫酸鹽還原菌的快速檢測方法。

為實現上述目的，本發明采用技術方案為：一種海水環境中硫酸鹽還原菌的快速檢測方法，將待測樣品與選擇性培養基在厭氧條件下培養，培養結束后將培養液經濾膜過濾，然后加入到GSH-Au(I)-Pb(II)熒光檢測液中，待測樣品中的硫酸鹽還原菌代謝產生的硫離子與所述熒光檢測液中的GSH-Au(I)-Pb(II)反應，使得所述熒光檢測液的熒光淬滅，通過所述熒光檢測液中的熒光強度變化得出待測樣品中硫酸鹽還原菌的濃度。

所述待測樣品經6000-8000轉/分鐘離心10-15分鐘后，收集沉淀加入到選擇性培養基中培養。

所述選擇性培養基為：1升陳海水中加入0.4-0.6克硫酸鈉，0.4-0.6克硫酸氫二鉀，1.0-1.5克氯化銨，0.1-0.2克氯化鈣，1.5-2.0克硫酸鎂，1.0-1.5克酵母提取物，3-5毫升乳酸鈉。所述陳海水是把取來的新鮮海水裝入玻璃瓶儲放在暗處數星期后得到的海水。

所述待測樣品與選擇性培養基在厭氧條件下培養時間為1-3天。

所述待測樣品與選擇性培養基在厭氧條件下的培養溫度為30-35℃。

培養結束后所述培養液經0.25微米濾膜過濾。

所述GSH-Au(I)-Pb(II)熒光檢測液的制備方法為，將四氯金酸與還原性谷胱甘肽于室溫下混合均勻后，加入氫氧化鈉調節溶液至無色透明，老化1小時后，向其中加入硝酸鉛反應5-10分鐘，使其發出熒光。

所述熒光檢測液的熒光強度是在激發波長為360nm，發射波長為560nm條件下測得的。

所述待測樣品包括但不限于水樣、土壤。

所述待測樣品中硫酸鹽還原菌的濃度由所述熒光檢測液中的熒光完全淬滅所需要的時間計算得出，其關系式為LogC_SRB＝9-0.08333t，t是培養時間。

本發明的有益效果在于：

本發明利用硫酸鹽還原菌代謝產生的硫離子對檢測液的響應，通過熒光檢測液中的GSH-Au(I)-Pb(II)與硫酸鹽還原菌的代謝產物硫離子反應，使熒光檢測液的熒光強度降低，從而實現對硫酸鹽還原菌的快速檢測。本發明不使用生物酶，反應條件溫和，易保存。本發明方法選擇性高，檢測周期短，成本低，具有極大的推廣價值。此外，本發明不限于對海水環境中的硫酸鹽還原菌作快速檢測，對于其他水環境中的硫酸鹽還原菌的快速檢測同樣適用。

附圖說明

圖1為GSH-Au(I)-Pb(II)熒光檢測液由無熒光變為發出強熒光。