[發明專利]一種培育具有馬鈴薯Y病毒屬廣譜病毒抗性的轉基因大豆的方法

有效

• 申請號: 201811480768.8
• 申請日: 2018-12-05
• 公開（公告）號: CN109355308B
• 公開（公告）日: 2022-01-11
• 發明（設計）人: 智海劍;高樂;落金艷;丁雪妮;李凱;王濤;翟銳
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/29;A01H5/00;A01H6/54
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

本發明公開了一種培育具有馬鈴薯Y病毒屬廣譜病毒抗性的轉基因大豆的方法。該方法是通過基因工程的手段沉默大豆中的eIF4E基因獲得具有廣譜病毒抗性的轉基因大豆；優選通過構建SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干擾片段，將其導入大豆獲得具有廣譜病毒抗性的轉基因大豆。按照該方法能夠獲得具有馬鈴薯Y病毒屬廣譜病毒抗性的轉基因大豆，為抗病大豆育種工作具有深遠意義。

技術領域

本發明屬于基因工程領域，涉及一種培育具有馬鈴薯Y病毒屬廣譜病毒抗性的轉基因大豆的方法。

背景技術

大豆花葉病毒(Soybean mosaic virus，SMV)病是一種全球性大豆病害，廣泛分布于世界各大豆產區，嚴重影響大豆的產量和品質。SMV屬于馬鈴薯Y病毒科(Potyviridae)，馬鈴薯Y病毒屬(Potyvirus)，大豆花葉病毒種。大豆感染SMV后，會產生花葉和壞死等癥狀，造成大豆光合面積減少和光合能力降低，植株矮化，生長量下降，籽粒出現褐斑，造成大豆產量損失約35％-50％，甚至絕收。

根據遺傳學標準可將抗性基因劃分為顯性抗性基因和隱性抗性基因兩個類型，寄主擁有顯性抗性基因或者病毒繁殖所依賴的隱性抗性基因發生突變、缺失都將阻礙病毒的侵染。大多數已知的顯性抗性基因主要是在抗真菌和細菌病害中發揮作用，而在植物抗病毒研究中則更容易發現隱性抗性基因。目前，在已知的植物對Potyvirus的抗性基因中，40％是隱性的，其中絕大多數與真核翻譯起始因子eIF4E(Eukaryotic translationinitiation factor 4E)有關。eIF4E能夠連接在植物mRNA帽子結構上，對蛋白翻譯的起始階段進行調節，所以目前普遍認為病毒的VPg蛋白起到類似于帽子結構的作用，通過植物eIF4E介導病毒RNA的翻譯，病毒的VPg蛋白能否與寄主的eIF4E發生互作影響著寄主對病毒的抗性。

eIF4E為植物抗病毒研究提供了新的思路，即可以通過轉基因技術將其干擾片段導入植株體內，通過誘發RNA干擾(RNA interference，RNAi)在轉錄水平沉默同源靶基因的功能，從而獲得抗病材料。因此，應用基于RNAi原理的大豆轉基因技術，對隱性抗病基因eIF4E進行特異性沉默，進而通過抗病鑒定確認該基因是否對SMV存在抗性，這對挖掘SMV隱性抗病基因、明確其抗性機制以及探索隱性抗病基因在轉基因抗病育種中的應用具有重要價值。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的上述不足，提供一種培育具有馬鈴薯Y病毒屬廣譜病毒抗性的轉基因大豆的方法。

本發明的目的可通過以下技術方案實現：

一種培育具有馬鈴薯Y病毒屬廣譜病毒抗性的轉基因大豆的方法，通過基因工程的手段沉默大豆中的eIF4E基因獲得具有廣譜病毒抗性的轉基因大豆。

所述的方法，優選通過構建SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干擾片段，將其導入大豆獲得具有廣譜病毒抗性的轉基因大豆。

所述的方法，進一步優選通過構建含有SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干擾片段的RNAi載體，將其導入大豆獲得具有廣譜病毒抗性的轉基因大豆。

大豆eIF4E基因在培育具有馬鈴薯Y病毒屬廣譜病毒抗性的轉基因大豆中的應用。

所述的馬鈴薯Y病毒屬廣譜病毒抗性包括對SMV、BCMV和WMV的抗性。

SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干擾片段在培育具有馬鈴薯Y病毒屬廣譜病毒抗性的轉基因大豆中的應用。

所述的馬鈴薯Y病毒屬廣譜病毒抗性包括對SMV、BCMV和WMV的抗性。

有益效果：