[發明專利]一種基于金納米簇錨定羥基氧化鈷納米片的吡蟲啉熒光免疫分析方法

有效

• 申請號: 201811476773.1
• 申請日: 2018-12-05
• 公開（公告）號: CN109580939B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 盧革宇;閆旭;李紅霞;金蕊;孫鵬;劉方猛
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: G01N33/551
• 分類號: G01N33/551;G01N33/535;G01N21/64
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司 22201
• 代理人: 劉世純

1.一種基于金納米簇錨定羥基氧化鈷納米片的吡蟲啉熒光免疫分析方法，其特征在于，其步驟如下：

A、羥基氧化鈷納米片的制備：

首先制備CoOOH納米片，將KOH和CoCl₂按體積比1:4混合，然后超聲1-5min；將NaClO相比上述混合液體積比1:55加入上述溶液中，繼續超聲10-15min，然后10000rpm離心10-15min，收集羥基氧化鈷納米片產物；去離子水洗滌三次，冷凍干燥得到黑色粉末；最后，將羥基氧化鈷納米片用去離子水溶解稀釋至0.025mg mL^-1備用；

B、谷胱甘肽功能化的金納米簇AuNCs制備：

將HAuCl₄和GSH按照體積比1:4混合，在1500r/min磁力攪拌過程中加入8倍體積的超純水；然后，將上述混合物加熱到70-80℃反應24小時以上，即可獲得黃色AuNCs溶液，通過透析進行純化，并通過冷凍抽干獲得黃色AuNCs粉末，最后超純水溶解稀釋至0.20mg mL^-1備用；

C、CoOOH-AuNCs復合材料的制備：

將步驟A的羥基氧化鈷納米片溶液和步驟B制備的AuNCs溶液等體積混合，并超聲處理10-15分鐘，然后將混合溶液在10000rpm下離心10-15分鐘，10mL去離子水溶解沉淀，得到CoOOH-AuNCs復合材料溶液；

D、吡蟲啉的熒光免疫分析：

取200μL包被抗原加入到96孔板，37℃孵育2h，包被板用300μL小牛血清37℃封閉60min；然后取50μL的不同濃度的吡蟲啉，和抗吡蟲啉多克隆抗體加入孔板中37℃孵育60min，而后加入堿性磷酸酶(ALP)標記的二級抗體再次37℃孵育60min；隨后，加入100μL的L-抗壞血酸-2-磷酸(AAP)37℃反應60min，將上述反應液與100μL的CoOOH-AuNCs復合物和100μL的Tris-HCl緩沖液37℃混合反應10min，然后進行信號放大和指示，最后，加入1700μL的超純水，進行熒光檢測并記錄。

2.如權利要求1所述的一種基于金納米簇錨定羥基氧化鈷納米片的吡蟲啉熒光免疫分析方法，其特征在于，步驟A所述的KOH的濃度為1.0mol L^-1，CoCl₂的濃度為10mol L^-1，NaClO的濃度為0.9mol L^-1。

3.如權利要求1所述的一種基于金納米簇錨定羥基氧化鈷納米片的吡蟲啉熒光免疫分析方法，其特征在于，步驟B所述的HAuCl₄的濃度為20mmol L^-1，GSH的濃度為100mmol L^-1。

4.如權利要求1所述的一種基于金納米簇錨定羥基氧化鈷納米片的吡蟲啉熒光免疫分析方法，其特征在于，步驟D所述的Tris-HCl緩沖液pH為9.0，濃度為10mmol L^-1。