[發明專利]一種DNA大片段篩選回收試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 201811457599.6
• 申請日: 2018-11-30
• 公開（公告）號: CN109504676A
• 公開（公告）日: 2019-03-22
• 發明（設計）人: 邱和松
• 申請（專利權）人: 廈門勝芨科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 宋平

1.一種DNA大片段篩選回收試劑盒，包括試劑盒A和試劑盒B，其特征在于：所述試劑盒A電泳液成分Tris 1240g，TAPS 1401.6g，EDTA 0.48g，seakem GOLD Agarose 75g；所述試劑盒B的成分DNA洗脫液NaI 40ml，醋酸鈉400ul，磁珠100μl。

2.根據權利要求1所述的一種DNA大片段篩選回收試劑盒，其特征在于：所述試劑盒A共10次反應，SYBR為5u；所述試劑盒B共10次反應，SYBR為50ul。

3.一種根據權利要求1-2任意一項所述的DNA大片段篩選回收試劑盒的使用方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1：將有機玻璃的電泳凝膠床洗凈，晾干，用膠帶將兩端的開口封好，放在水平的工作臺上，插上樣品梳；

S2：每次取Tris 124g,TAPS 140.16g，EDTA 0.48g，加1L的dH2O室溫放置備用；

S3：瓊脂糖凝膠的制備，稱取瓊脂糖放置，再取步驟2中液體中溶解，置微波爐或沸水浴中加熱至完全溶化，取出搖勻；

S4：取步驟2中液體50ml,seakem GOLD Agarose 75g，在950ml的dH2O內溶解；

S5：將冷卻到60℃的seakem GOLD Agarose溶液輕輕倒入電泳槽水平板上；

S6：待seakem GOLD Agarose膠凝固后，在電泳槽內加入步驟2中溶液，然后拔出梳子；

S7：將DNA樣品用微量移液器將混合液加到樣品槽中，每槽加10-20μl，記錄樣品的點樣次序和加樣量；

S8：安裝好電極導線，點樣孔一端接負極，另一端接正極，打開電源，調電壓至75V，電脈沖16h-20h，達到時間后停止電脈沖；

S9：加入SYBR 5ul到顯影液中，放入凝膠遮光蓋住，放置30分鐘；

S10：取出凝膠在藍光凝膠成像儀下快速切下所需要的片段瓊脂糖膠塊，加入400ul的NaI溶液，水浴10min；

S11：向步驟S10溶液中加入40ul的2.5mol/L醋酸鈉和400ul無水乙醇，在-20℃條件下放置15-30min，在轉速為10000rpm條件下離心10min；

S12：沉淀用70％酒精洗滌兩次后再次倒入70％乙醇，液體中放置磁珠10ul靜置2min，輕微攪拌1次，循環后去除磁珠，留取液體；

S13：沉淀用70％酒精洗滌1次，風干后加入dd H2O，并在2-8℃條件下放置。

4.根據權利要求1所述的一種DNA大片段篩選回收試劑盒的使用方法，其特征在于：所述步驟S3中制備的瓊脂糖凝膠量為110ml。

5.根據權利要求1所述的一種DNA大片段篩選回收試劑盒的使用方法，其特征在于：所述步驟S8中電脈沖采用型號為Part No.PPI0200。

6.根據權利要求1所述的一種DNA大片段篩選回收試劑盒的使用方法，其特征在于：所述步驟S10中加入的NaI溶液的濃度為6mol/L。

7.根據權利要求1所述的一種DNA大片段篩選回收試劑盒的使用方法，其特征在于：所述步驟S10中的水浴溫度條件為50-60℃。

8.根據權利要求1所述的一種DNA大片段篩選回收試劑盒的使用方法，其特征在于：所述步驟S12的循環次數為2次。