[發明專利]一種mir338基因沉默的臍帶間充質干細胞及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811447633.1
• 申請日: 2018-11-29
• 公開（公告）號: CN109609554B
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發明（設計）人: 田雨光;岳敏
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N5/10;A61K35/28;A61P25/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

本發明公開了一種mir338基因沉默的臍帶間充質干細胞及其制備方法和應用。所述制備方法包括以下步驟：S1.將目的基因插入慢病毒系統載體中，構建LentiCRISPR v2?mir338重組質粒；S2.將S1所得LentiCRISPR v2?mir338重組質粒與包裝質粒共轉染宿主細胞，制備得到慢病毒顆粒；S3.將S2所得慢病毒顆粒轉染HUMSCs，即得到基因工程化的HUMSCs。HUMSCs經沉默mir338基因表達后，細胞增殖速度加快，將HUMSCs注射到腦損傷小型豬顱內，對腦損傷有較好的治療效果。

技術領域

本發明涉及基因工程與生物醫學工程技術領域，具體地，涉及一種mir338基因沉默的臍帶間充質干細胞及其制備方法和應用。

背景技術

缺血性腦血管病(ischemic cerebrovascular disease，ICVD)是指局部腦組織包括神經細胞和膠質細胞及聯系纖維由于供血障礙發生的病變、壞死或功能瞬態損耗。目前，缺血性腦血管疾病在全部腦血管病中約占80％，并且腦缺血疾病有著發生率高，死亡率高，復發率高，致殘率高等特點。而我國是卒中高發的國家，每年新發腦卒中200萬人，卒中死亡人數約250萬人，年增長率達8.7％。臨床上因大腦中動脈閉塞導致的缺血性腦血管病占絕大多數。目前，隨著醫療水平和醫療服務條件的提高，特別是急救手段和治療效果的提高，使得腦卒中患者的死亡率逐漸下降，而生存下來的腦卒中患者大約有75％的人遺留不同程序的致殘，嚴重影響患者的日常生活活動能力和社交能力，給家庭和社會帶來了巨大的負擔，因此，研究腦缺血的治療及康復，降低其死亡率和致殘率，對提高患者的生活質量有著極大的意義。

干細胞是指具有無限或較長期的自我更新能力，并能產生至少一種高度分化子代細胞的細胞，主要存在于胚胎、骨髓、外周血、臍帶血等處，而血液(外周血、臍帶血)中的干細胞，目前發現有造血干細胞(hematopoietic stem cells，HSCs)和間充質干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)兩種。臍帶血中干細胞含量豐富，明顯超過外周血含量。MSCs是混合細胞群，不具備典型的形態特征，其表達的表面標志抗原具有非單一性，它表達間質細胞、內皮細胞和表皮細胞的表面標志，目前沒有找到MSCs的特異性抗原標記，鑒定MSCs主要是根據其形態、功能等。許多研究證明MSCs均標記為：SH₂(+)、SH₃ (+)、CD₂₉(+)、CD₄₄(+)、CD₇₁(+)、CD₉₀(+)、CD₁₀₅(+)、CD₁₀₆(+)、CD_120a (+)、CD₁₂₄(+)、CD₁₆₆(+)。MSCs在體外可分化為神經樣細胞。如在腦源性神經營養性因子、堿性成纖維生長因子的誘導或腦組織細胞共培養，MSCs能分化為具有神經元和神經膠質細胞標志的細胞。

臍帶血間充質干細胞作為最有潛力的多潛能干細胞之一，其來源豐富、采集方便、安全、無倫理問題，且具有免疫調節作用等特點，決定了其在臨床治療方面具有很大的應用前景。目前干細胞的臨床應用有兩種方法：一是直接將臍帶血間充質干細胞移植體內，通過體內的微環境誘導其為相應的細胞，發揮相應的作用；二是將臍帶血間充質干細胞體外培養、定向誘導其分化為目的神經樣細胞，然后通過一定的方法植入到體內，治療相關神經系統疾病。臍帶血間充質干細胞作為最有潛力的多潛能干細胞，具有多向分化潛能，在體外能夠定向誘導分化為各種神經細胞，為神經系統疾病的治療提供了新的思路。