[發(fā)明專利]胃蛋白酶原Ⅰ檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811446773.7
• 申請日: 2018-11-29
• 公開（公告）號: CN109307766A
• 公開（公告）日: 2019-02-05
• 發(fā)明（設計）人: 馬雷;史小芹;王傳新;杜魯濤;渠文濤;劉雅奇;周金龍;田會會;李曉霞;喬曉芳;付光宇;吳學煒
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/573;G01N33/535;G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 鄭州異開專利事務所(普通合伙) 41114
• 代理人: 王霞

本發(fā)明公開了一種胃蛋白酶原Ⅰ檢測試劑盒，包括包被有胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的磁微粒，含有辣根過氧化物酶（HRP）標記胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的酶稀釋液，含有胃蛋白酶原Ⅰ抗原的校準品及樣品稀釋液；所述樣品稀釋液中含有阻斷劑成分；所述阻斷劑為一種或多種中和HAMA干擾的人抗鼠抗體。本發(fā)明的優(yōu)點在于將高靈敏度的化學發(fā)光技術和磁微粒制備技術相結合，配套使用AutoLumo全自動檢測分析儀，實現了檢測全自動化；同時在樣品稀釋液中添加了阻斷劑成分，可消除樣本中嗜異性抗體，大大提高了試劑盒的抗干擾能力。

技術領域

本發(fā)明涉及生物檢測技術，尤其是涉及一種胃蛋白酶原Ⅰ檢測試劑盒。

背景技術

胃蛋白酶原(PG)是胃液中胃蛋白酶(蛋白水解酶)的無活性前體，為由375個氨基酸組成的蛋白多肽鏈，平均相對分子質量為42000 Da，人胃黏膜中有7組胃蛋白酶同工酶原。 根據生化性質、免疫原性、細胞來源及組織內分布可分為胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）兩個亞群，1-5組分免疫原性近似，稱為PGⅠ，主要由胃底腺的主細胞的黏液頸細胞分泌；組分6-7被稱為PGⅡ，除由胃體和胃底粘膜的泌酸腺的主細胞分泌外，泌酸腺的黏液頸細胞、賁門腺和胃竇的幽門腺的黏液細胞以及十二指腸上段的Brunner腺也能產生PGⅡ，胃黏膜合成的PGⅡ約為總量的25％。胃幾乎是PG的惟一來源，合成后的PG大部分進入胃腔，在酸性胃液作用下活化成胃蛋白酶原，只有少量PG(約1％)透過胃黏膜毛細血管進入血液循環(huán)，故血清PGⅠ和 PGⅡ反映了胃黏膜不同部位的分泌功能。當胃黏膜發(fā)生病理變化時，血清PG含量也隨之發(fā)生改變。胃液和血清PG水平與活組織病理變化結果常一致，因此，監(jiān)測血清中PG的濃度可以作為監(jiān)測胃黏膜狀態(tài)的手段。胃底腺黏膜萎縮的過程中，分泌PGⅠ的主細胞減少，幽門腺細胞增多，從而造成PGⅠ和PGⅡ的比值降低。因此PGⅠ和PGⅡ的比值可以作為胃底腺黏膜萎縮的指征，免疫學方法檢測PGⅠ和PGⅡ水平并結合PGⅠ和PGⅡ的比值可用于篩查胃底腺黏膜萎縮性疾病，如胃炎、胃癌等等有關。

現有技術中，PGⅠ的檢測方法包括酶聯免疫吸附測定(ELISA)、免疫比濁法、 化學發(fā)光免疫分析法(CLIA)等。酶聯免疫吸附測定方法操作過程復雜，測定時間較長，影響因素多，且不適合急診樣本的檢測；免疫比濁法測定，抗原或抗體量過大時，可出現可溶性復合物，造成誤差，易受脂血影響。化學發(fā)光免疫分析法雖具有反應時間短等多項優(yōu)點，但抗干擾等性能較低，這是由于目前免疫檢測試劑盒所用的抗體大多數來源于實驗動物，嗜異性抗體可與多種動物的免疫球蛋白的Fc和Fab表位發(fā)生非特異性結合，從而干擾檢測結果出現假陽或漏檢。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種胃蛋白酶原Ⅰ檢測試劑盒，可大大提高其抗干擾能力。

為實現上述目的，本發(fā)明可采取下述技術方案：

本發(fā)明所述的胃蛋白酶原Ⅰ檢測試劑盒，包括包被有胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的磁微粒，含有辣根過氧化物酶（HRP）標記胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的酶稀釋液，含有胃蛋白酶原Ⅰ抗原的校準品及樣品稀釋液；所述樣品稀釋液中含有阻斷劑成分；所述阻斷劑為一種或多種中和HAMA干擾的人抗鼠抗體。

所述樣品稀釋液的配方組成為緩沖液0.01~0.2 mol/L，防腐劑0.1%~0.5%（w/v），保護蛋白1%~10%（w/v），EDTA 1%~10%（w/v），阻斷劑200~500 ng/mL，色素0.001%（g/v）。

所述EDTA為乙二胺四乙酸二鈉或/和乙二胺四乙酸二鉀。

本發(fā)明中包被有胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的磁微粒，含有辣根過氧化物酶標記胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的酶稀釋液，含有胃蛋白酶原Ⅰ抗原的校準品及樣品稀釋液四個組分中所用的稀釋液為PBS、MES、MOPS中的任一種，其pH=6.0～8.0。

所述稀釋液中的保護蛋白為牛血清白蛋白、牛血清、酪蛋白中的一種或兩種。所述稀釋液中的防腐劑為P300、Bro、MIT、NaN₃的任意組合。