[發(fā)明專利]一種測定草內(nèi)源激素的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811439296.1
• 申請日: 2018-11-29
• 公開（公告）號: CN109596726A
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陸欣瑜
• 申請（專利權(quán)）人: 陸欣瑜
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種測定草內(nèi)源激素的方法，包括以下步驟：1)將草坪草用磷酸鈉緩沖液和二氯甲烷進行兩次提取，兩次離心后，然后氮氣吹干，得到草坪草內(nèi)源激素；2)將步驟1)得到的草坪草內(nèi)源激素用甲醇溶解后，利用固相萃取柱進行脫色脫脂，取洗脫液，然后真空抽干后，再用甲醇和乙酸的混合溶液溶解；3)以甲醇和乙酸作為流動相，利用高效液相色譜對經(jīng)過步驟2)處理后的草坪草內(nèi)源激素進行測定，得到草坪草內(nèi)源激素的含量。本發(fā)明的方法選擇適宜的內(nèi)源激素提取方法和色譜條件，準確測定草坪草內(nèi)源激素的含量，與現(xiàn)有技術(shù)進行相比，具有回收率、提取效率高；準確率高、重復性好的優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物內(nèi)源激素的測定領(lǐng)域，具體地，涉及一種測定草內(nèi)源激素的方法。

背景技術(shù)

自20世紀70年代采用高效液相色譜分析植物內(nèi)源激素以來，由于其具有靈敏度高和選擇性、重復性好及分析速度快等特點，已在除乙烯外的四大類植物激素和生長調(diào)節(jié)劑的研究領(lǐng)域中得到不斷發(fā)展。利用高效液相色譜對植物內(nèi)源激素進行定量測定的重點在于選擇出合適的內(nèi)源激素提取方法和色譜條件。但因生物體內(nèi)源激素的復雜性和特殊性，目的成分的分離提取是極為關(guān)鍵的一步，而且是直接影響其精密度、回收率的重要因素。傳統(tǒng)的利用高效液相色譜法測定植物內(nèi)源激素的方法，通常是利用80％的冰甲醇來提取植物內(nèi)源激素，然后過濾，收集濾液，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，用少量水溶解殘液，凍融過夜，融化后，離心取上清液，調(diào)節(jié)pH，加乙酸乙酯萃取，取有機相，然后再旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，最后用流動相溶解，上樣。這種方法不但操作復雜，而且回收率相當?shù)?約為80％)，不利于準確地測定植物內(nèi)源激素含量。

因此，選擇出合適的內(nèi)源激素提取方法和色譜條件，對于測定植物內(nèi)源激素，尤其是草坪草內(nèi)源激素的含量將有重大的意義。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種測定草坪草內(nèi)源激素的方法。

本發(fā)明提供的測定草內(nèi)源激素的方法，包括以下步驟：

1)將草坪草用磷酸鈉緩沖液和二氯甲烷進行兩次提取，兩次離心后，然后氮氣吹干，得到草坪草內(nèi)源激素；

2)將步驟1)得到的草坪草內(nèi)源激素用甲醇溶解后，利用固相萃取柱進行脫色脫脂，取洗脫液，然后真空抽干后，再用甲醇和乙酸的混合溶液溶解；

3)以甲醇和乙酸作為流動相，利用高效液相色譜對經(jīng)過步驟2)處理后的草坪草內(nèi)源激素進行測定，得到草坪草內(nèi)源激素的含量。

其中，步驟1)中，所述磷酸鈉緩沖液的濃度為0.05M，pH值為7.0，還含有0.02％～0.05％(w/v，優(yōu)選0.02％)的二乙基二硫代氨基甲酸鈉。w/v為質(zhì)量體積比，即磷酸鈉緩沖液中含有0.02～0.05％二乙基二硫代氨基甲酸鈉指：100mL磷酸鈉緩沖液中含有0.02～0.05g二乙基二硫代氨基甲酸鈉。二乙基二硫代氨基甲酸鈉作為抗氧化劑，可以起到避免提取出來的草坪草內(nèi)源激素被空氣氧化的作用。

其中，步驟1)中，草坪草與磷酸鈉緩沖液的質(zhì)量體積比為1:8～1:12，優(yōu)選1:10(g:mL)。

其中，步驟1)中，磷酸緩沖液與二氯甲烷的體積比為3:4～1:1，優(yōu)選1:1。

其中，步驟1)中，用磷酸鈉緩沖液進行提取的條件包括：在4℃下提取0.8～1.2h后，用1M鹽酸調(diào)pH至2.5～3.0，優(yōu)選為：在4℃下提取1h后，用1M鹽酸調(diào)pH至2.6。

其中，步驟1)中，用二氯甲烷進行提取的條件包括：在4℃下提取0.8～1.2h；優(yōu)選為：在4℃提取1h。

其中，步驟1)中，兩次離心的條件包括：在8000～12000rpm下離心8～15min，取下清液，殘渣再用二氯甲烷進行提取，在8000～12000rpm下再次離心8～15min，合并下清液。優(yōu)選為：在10000rpm下離心10min，取下清液，殘渣再用二氯甲烷進行提取，在10000rpm下再次離心10min，合并下清液。