[發明專利]采用兩步酶法催化濕小球藻制備生物柴油的方法

在審

• 申請號: 201811434795.1
• 申請日: 2018-11-28
• 公開（公告）號: CN109337940A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 陳峰;何勇錦;張昱;王小斐;姜悅;羅明芳
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12R1/89
• 代理公司: 石家莊海天知識產權代理有限公司 13101
• 代理人: 田文其

1.采用兩步酶法催化濕小球藻制備生物柴油的方法，其特征在于包括如下工藝步驟：

A、培養小球藻

在滅菌后含有碳源的BG11培養基中采用異養培養的方法培養小球藻，培養條件：搖瓶培養，培養基按照體積比為40％的比例裝量，接種量為每升含有碳源的BG11培養基接入小球藻0.05g-0.2g，培養溫度為23℃-28℃，搖床轉速為120轉/分鐘-220轉/分鐘，培養周期6-10天；

B、濕小球藻破壁

將步驟A中獲得的發酵液高速離心后獲得濕小球藻，按照每克小球藻干重加入5mL-20mL蒸餾水以及0.01％-1％纖維素酶的比例在濕藻體中加入蒸餾水及纖維素酶進行酶解，將酶解后的物料高速離心后獲得破壁的濕小球藻；

C、轉酯化獲得生物柴油

在步驟B中獲得的破壁的濕小球藻中按照每0.5克小球藻干重加入2mL-5mL的乙醇和10μL-60μL的液體脂肪酶的比例加入乙醇及液體脂肪酶進行轉酯化反應后獲得生物柴油，轉酯化反應的條件是：溫度為25℃-40℃，轉速為150轉/分鐘-250轉/分鐘，時間為24小時-96小時。

2.根據權利要求1所述的采用兩步酶法催化濕小球藻制備生物柴油的方法，其特征在于所述的步驟A中的小球藻選自普通小球藻Chlorella vulgaris Carolina 15-2075、小球藻Chlorella zofingiensis ATCC 30412、普通小球藻Chlorella vulgaris UTEX 395和蛋白核小球藻Chlorella pyrenoidosa FACHB-9、原始小球藻Chlorella protothecoidesCS-1、小球藻Chlorella sacchrarophila FACHB-4、小球藻Chlorella luteorividisFACHB-1中的一種。

3.根據權利要求1所述的采用兩步酶法催化濕小球藻制備生物柴油的方法，其特征在于步驟A中每升含有碳源的BG11培養基包含如下質量的原料：

NaNO₃ 0.1g-2g；K₂HPO₄ 0.02g-0.1g；碳源；MgSO₄·7H₂O 0.025g-0.1g；CaCl₂·H₂O0.01g-0.05g；Na₂CO₃ 0.01g-0.1g；C₆H₈O₇ 0.001g-0.01g；EDTA 0.001g-0.01g；微量元素溶液0.5mL-2mL。

4.根據權利要求3所述的采用兩步酶法催化濕小球藻制備生物柴油的方法，其特征在于每升微量元素溶液包含如下質量的原料：

H₃BO₃ 2g-4g；MnCl₂·4H₂O 1g-2.5g；ZnSO₄·7H₂O 0.1g-0.3g；NaMoSO₄·2H₂O 0.2g-0.5g；CuSO₄·5H₂O 0.01g-0.1g；Co(NO₃)₂·6H₂O 0.01g-0.1g。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的采用兩步酶法催化濕小球藻制備生物柴油的方法，其特征在于所述的步驟A中的碳源選自葡萄糖、糖蜜、蔗糖、果糖和甘露糖中的一種。

6.根據權利要求5所述的采用兩步酶法催化濕小球藻制備生物柴油的方法，其特征在于所述的步驟A中的碳源用量分別為每升含有碳源的BG11培養基中含有葡萄糖1g-40g、或者糖蜜0.5g-20g、或者蔗糖1g-30g、或者果糖1g-30g，或者甘露糖1g-35g。