[發明專利]一種脂肪干細胞的培養方法

在審

• 申請號: 201811431804.1
• 申請日: 2018-11-27
• 公開（公告）號: CN109355256A
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發明（設計）人: 柴勛;楊娟;吳國祥
• 申請（專利權）人: 上海科醫聯創生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/077
• 代理公司: 寧波鄞州全方專利商標事務所(普通合伙) 33242
• 代理人: 樓瑜舟;劉永斌

1.脂肪干細胞的培養方法，其特征在于，所述脂肪干細胞的培養方法中使用滅活的成纖維細胞進行選擇性培養。

2.根據權利要求1所述的脂肪干細胞的培養方法，其特征在于，所述滅活的成纖維細胞的制備方法為使用絲鏈霉素滅活。

3.根據權利要求2所述的脂肪干細胞的培養方法，其特征在于，所述脂肪干細胞的培養方法步驟如下：

步驟a：消化脂肪；

步驟b：分離出經所述步驟a消化后的混合細胞，并對剩余的疏松結締組織進行消化得到滅活的成纖維細胞；

步驟c：對所述混合細胞進行選擇性培養得到脂肪干細胞，所述選擇性培養的方法為在所述混合細胞中按比例添加所述滅活的成纖維細胞。

4.根據權利要求3所述的脂肪干細胞的培養方法，其特征在于，所述脂肪干細胞的培養方法中使用的培養基為基礎培養基L-DMEM+血清替代物。

5.根據權利要求3所述的脂肪干細胞的培養方法，其特征在于，所述比例為5：1。

6.根據權利要求2所述的脂肪干細胞的培養方法，所述脂肪干細胞的培養方法步驟如下：

步驟1、取自體脂肪組織；

步驟2、放于無菌平皿中，用含有抗生素的生理鹽水沖去表面血液；

步驟3、取出經步驟2的脂肪組織，放入平皿中，用手術刀剪碎；

步驟4、將經步驟3的脂肪組織轉入離心管中，用DPBS洗滌，直至洗滌液澄清；

步驟5、加入等脂肪組織體積消化液NB4G；

步驟6、37℃恒溫震蕩30到80min；

步驟7、離心1500rpm/5min，此時細胞分3層：油脂、消化液及沉淀；

步驟8、小心去除油脂層和消化液層；

步驟9、加入PBS，大力搖晃，使細胞從結締組織中充分脫離；

步驟10、將疏松結締組織從離心管中挑出，繼續用消化液NB4G消化2個小時，

步驟11、將經步驟10挑去白色疏松結締組織的已經消化好的細胞，用事先預熱好的培養基洗一遍，1500rpm/5min，按1X10⁴/CM²的細胞量接種到培養瓶，加入10ml完全培養基，所述消化好的細胞為混合細胞；

步驟12、將經步驟10挑出并消化的疏松結締組織消化下來的細胞洗三遍；

步驟13、將經步驟12洗后的細胞用20ug/ml的絲鏈霉素滅活3個小時，洗三遍，1500rpm/5min，按0.2X10⁴/CM²的細胞量加到步驟11的培養瓶中。

步驟14、將經步驟13的培養瓶放入37℃,5％CO²培養箱中培養，隔天換液；

步驟15、當細胞融合到80％時進行傳代，傳代得到純化的脂肪干細胞。

7.一種滅活的成纖維細胞的用途，其特征在于，所述滅活的成纖維細胞用于脂肪干細胞的培養。

8.根據權利要求7所述的一種滅活的成纖維細胞的用途，其特征在于，所述滅活的成纖維細胞用于脂肪干細胞的選擇性培養。

9.根據權利要求8所述的一種滅活的成纖維細胞的用途，其特征在于，所述滅活的成纖維細胞來源為脂肪組織。