[發明專利]基于類器官方法構建卵巢癌移植瘤模型及應用

在審

• 申請號: 201811409825.3
• 申請日: 2018-11-23
• 公開（公告）號: CN109392843A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 洪豐;彭存旭;畢研貞;潘紅娜;黃蓉;王全全;張凱;諶通;張鳳梅;上舒振峰
• 申請（專利權）人: 上海美峰生物技術有限公司
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;C12N5/09;C12Q1/02
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 岳泉清

1.基于類器官方法構建卵巢癌移植瘤模型，其特征在于它是按照以下步驟進行的：

一、獲取人原代卵巢癌腫瘤細胞：取卵巢癌細胞和卵巢癌組織間質細胞，以含10％胎牛血清的DMEM、質量百分含量為1％青霉素和質量百分含量為1％鏈霉素的完全培養液將上述細胞混勻后進行臺盼藍計數；若臺盼藍計數活細胞數>95％，則調整細胞濃度至2×10⁷/mL，接種到培養板或培養瓶后放入37℃、5％CO²培養箱，得人原代卵巢癌細胞懸液；

二、將微載體浸泡于體積百分含量為75％的酒精24h后，用1×PBS緩沖液清洗4遍，置于DMEM培養基中孵育24～72h；將步驟一得到的人原代卵巢癌細胞懸液與孵育好的微載體混合，在溫度為37℃、5％CO²培養箱中培養12～48h，得到孵育后的細胞-微載體復合體；

三、用1×PBS緩沖液清洗步驟二孵育后的細胞-微載體復合體4遍，再用1×PBS緩沖液重懸細胞并調整細胞濃度至2×10⁷/mL，調整微載體濃度至250～300ug/mL，得細胞-微載體混懸液，置于冰上備用；將細胞-微載體混懸液注射于7～8周的正常免疫小鼠體內，體內植入20～30天后，即構建完成患者來源的卵巢癌移植瘤小鼠模型。

2.根據權利要求1所述的基于類器官方法構建卵巢癌移植瘤模型，其特征在于所述的微載體是由多層孔狀條索樣相互交聯卷曲形成的可正電化的有機復合多聚物組成，含“迷宮”樣不規則結構體。

3.根據權利要求1所述的基于類器官方法構建卵巢癌移植瘤模型，其特征在于步驟一得到的人原代卵巢癌細胞懸液與孵育好的微載體的體積比為3～4：1。

4.根據權利要求1所述的基于類器官方法構建卵巢癌移植瘤模型，其特征在于所述的小鼠為免疫功能正常的小鼠。

5.根據權利要求1所述的基于類器官方法構建卵巢癌移植瘤模型，其特征在于所述的小鼠為C57BL/6小鼠或BALB/c小鼠。

6.根據權利要求1所述的基于類器官方法構建卵巢癌移植瘤模型，其特征在于卵巢癌細胞和卵巢癌組織間質細胞是通過取鮮卵巢癌組織20～30g，以質量百分含量為0.025％-0.05％的膠原蛋白酶消化分離，得到卵巢癌細胞和卵巢癌組織間質細胞。

7.根據權利要求1所述的基于類器官方法構建卵巢癌移植瘤模型，其特征在于步驟三中細胞-微載體混懸液注射小鼠的部位為右腋下皮下，每只注射100～150uL。

8.如權利要求1構建的卵巢癌移植瘤模型的應用，其特征在于它是用于卵巢癌藥物研發。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于它是在抗卵巢癌藥物篩選中的臨床應用。