[發明專利]一種重組人角質細胞生長因子-1及其制備方法和用途在審
| 申請號： | 201811408920.1 | 申請日： | 2018-11-23 |
| 公開（公告）號： | CN109402130A | 公開（公告）日： | 2019-03-01 |
| 發明（設計）人： | 高坪;張培海 | 申請（專利權）人： | 成都中醫藥大學附屬醫院 |
| 主分類號： | C12N15/12 | 分類號： | C12N15/12;C12N15/85;C12N5/10;C07K14/50;C07K1/18;A61K38/18;A61P17/02;A61P11/00;A61P13/10;A61P13/02 |
| 代理公司： | 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 李高峽;張娟 |
| 地址： | 610000 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 重組人角質細胞生長因子 角質細胞生長因子 疾病 損傷 中國倉鼠卵巢細胞系 膀胱 肺部損傷 尿道上皮 細胞增殖 重組質粒 黏膜組織 電轉 質粒 制備 治療 皮膚 基因 生產 | ||
1.一種重組人KGF-1的基因片段，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一種重組載體，其特征在于：包含SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。
3.根據權利要求2所述的重組載體，其特征在于：所述的重組載體是pCMV質粒。
4.一種重組質粒，其特征在于：它包含權利要求2和3所述的核苷酸序列和質粒載體，其特征是：所述重組質粒是表達質粒pCMV-KGF-1。
5.一種表達重組人KGF-1基因的重組細胞，其特征在于包含權利要求2和3所述的重組質粒。
6.根據權利4要求所述表達細胞，其特征在于：所述的重組細胞為含重組質粒的中國倉鼠卵巢CHO細胞。
7.一種重組人KGF-1，其特征在于：它的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
8.一種制備權利要求1或7所述重組人KGF-1的方法，其特征在于：包含如下步驟：
(1)取權利要求5或6所述的重組細胞，接種于商業用無血清添加培養基Acti Pro中懸浮培養，期間流加補料Cell Boost 7a powder supplement兩次，培養溫度37℃，加料時間為第3天和第5天，第7天于4℃條件下收集培養液，離心，過濾，得上清；
(2)取上清液，用離子交換層析技術分離純化：先用陰離子交換層析再陽離子交換層析；
陰離子層析時流動相A作為平衡緩沖液，用于沖洗層析系統流速1.5mL/min，檢測波長254nm和280nm；用流動相B對其目的蛋白進行梯度洗脫，收集洗脫樣品，所述梯度洗脫的方式為：100-50％A、0-50％B，洗脫20min；
陽離子層析時流動相A為：20mM檸檬酸，pH6.0；流動相B為：20mM檸檬酸，含1M氯化鈉，pH6.0；流速1.5mL/min，檢測波長254nm和280nm；用流動相B對其目的蛋白進行梯度洗脫，收集洗脫樣品，即得；所述梯度洗脫的方式為：100-70％A、0-30％B，洗脫20min；
所述流動相A為20mM的Tris-HCl溶液；所述流動相B為1M氯化鈉的20mM的Tris-HCl溶液。
9.權利要求7或8所述重組人KGF-1在制備治療皮膚損傷、黏膜組織損傷、肺部損傷、膀胱上皮損傷或尿道上皮損傷的藥物中的用途。
10.一種藥物，其特征在于：它是以權利要求7或8所述重組人KGF-1為活性成分，加上藥學上可接受的輔料制備而成的制劑。
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